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【求助】求高手帮忙!十万火急!

  • madong5758
    2007/10/15
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 我用的柱子:TSK-GEL SW Type Steel Column SWXL 7.8x30(cm x cm)样品:0.3g/L蛋白质溶液(检测其中蛋白质是否聚合)
    缓冲液:PH6.8的0.2M左右的磷酸盐缓冲液(浓度是否太高?)
    清洗液:10%的甲醇水溶液
    流速:0.8ml/min
    最开始用的时候没加保护柱,压力大约41巴。后来加上保护柱后压力大约46巴,进样大约100次后,今天发现压力突然增大了达到63巴,柱子压力的上限为70巴。
    我每次做完实验都用10%甲醇冲柱子半小时,再用水冲半小时。再拆柱子。
    我不知道是什么原因造成柱子压力突然增大,求高人指点,怎么才能使柱子压力降下来?用什么洗液冲洗柱子?还有柱子能不能反向冲?
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  • 意境

    第1楼2007/10/15

    具体原因不知道,应该是某个地方堵了,包含那个滤芯。柱子是可以反冲,你应该反冲一下,我曾经作过一次蛋白质检测,不过当初冲柱子好像不是10%甲醇,是纯的甲醇,个人看法,达人赶快出现帮忙解决问题

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  • Easy-Boy

    第2楼2007/10/16

    你不能将柱子保存在100%的水中,而应当在拆柱子前用80%甲醇冲洗柱子。

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  • wsy18

    第3楼2007/10/16

    清洗再生柱子的方法,供参考:
    [flash]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/files/200718122023.swf[/flash]

    点击下部俩小叶片可观看下一页或返回,点击刷新按钮可返回首页。

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  • xiaomity

    第4楼2007/10/16

    磷酸盐浓度也就20mmol左右才是可用的.做蛋白不加保护柱会很快被残留蛋白给堵塞.在其他方法都搞不定时,可以用HPLC级THF冲洗30分钟(1ml/min),再用甲醇或乙腈冲洗30分钟,再降速到0.2ml/min分钟冲洗30分钟

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  • xiaomity

    第5楼2007/10/16

    上面都是C18柱的清洗,凝胶柱估计得用5%甲醇低流速(0.2ml/min)冲洗过夜.换根保护柱.

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  • wsy18

    第6楼2007/10/16

    关于蛋白质凝胶柱的清洗再生在三楼flash课件的第五节中有介绍,有二种情况,方法是不同的,可以参考。

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  • zap_1979

    第7楼2007/10/16


    你好!
    你使用的缓冲溶液盐浓度不算很高,但在你做完之后没有清洗好管路,泵以及柱子等方面.
    建议你现在先用低流量,60%水+40%甲醇或者乙腈送开主动阀,把纯水放在你之前放缓冲溶液的瓶子中,冲洗整个管路,看压力,如果压力过高,可能要换主动阀芯之类的东西,如果没问题,冲一段时间后,低流量冲洗柱子,等压力正常之后,再20%左右的异丙醇冲洗管路,可以用剃度洗脱程序变化冲洗,一端时间后可能会正常,再用60%水+40%甲醇或者乙腈冲洗.
    估计是你做后没有好好冲洗,谢谢,希望对你有帮助!

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  • madong5758

    第9楼2007/10/16

    哇!这么多的高手,看来来对地方了,谢谢各位老师啊。
    昨天采取的措施:
    1、我先把色谱仪的滤芯(比较脏了)换了,压力降了大约4巴。
    2、用超纯水0.2ml/min反向冲了3个小时,在柱前头冲出来个小米粒大小,塑料材质,灰白色的颗粒,不知道是不是柱子里的东西。
    3、我又正接柱子用10%的甲醇0.2ml/min冲了20个小时柱子,现在柱子压力降到46巴,和开始用的时候差不多了。
    我还有个问题啊,我用的柱子型号:TSK-GEL SW Type
    Steel Cloumn SWXL 7.8x30(cm x cm)
    (说明书丢了)这种型号的柱子可以用纯甲醇冲么?我一般就用10%甲醇冲。保存得用什么溶液保存?

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