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【讨论】吸光度法测定酪氨酸酶活力

紫外可见分光光度计(UV)

  • 酪氨酸酶活力的测定,文献中报道的方法如下:测定波长475nm的吸光值随时间增长直线,从直线斜率求得酶活力,消光系数按E=3700mol-1L.cm-1计算。
    但是我不明白通过吸光值对时间的直线斜率怎么求得酶活力?还有为什么要指定消光系数?计算过程中有什么作用?
    希望得到高人的指点阿
    问题补充:我测定时酪氨酸酶用的是mushroom tyrosinase,以酪氨酸为底物,475nm处测定吸光度是基于生成的dopachrome量。
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  • huangza

    第1楼2008/01/23

    应助达人

    酶活力的大小可用在一定条件下,酶催化某一化学反应的速度来表示。测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。在一般的酶促反应体系中,底物往往是过量的,测定初速度时,底物减少量占总量的极少部分,不易准确检测,而产物则是从无到有,只要测定方法灵敏,就可准确测定。因此一般以测定产物的增量来表示酶促反应速度较为合适。

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  • huangza

    第2楼2008/01/23

    应助达人

    在测定条件下,1min水解酪蛋白释放的三氯乙酸可溶物,在280nm时吸光度与1μg的酪氨酸吸光度相当时,所需要的酶量为1个酶活力单位,U/g。

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  • zam0825

    第3楼2008/01/23

    看看这篇文章,或许有帮助
    http://www.lababc.com/literature/Article_Show.asp?ArticleID=7283

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  • 初学者&九点虎

    第4楼2008/01/23

    您的底物是什么,按照米氏方程得出的结论,上大学学过,现在还给老师了

    zam0825 发表:看看这篇文章,或许有帮助
    http://www.lababc.com/literature/Article_Show.asp?ArticleID=7283

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  • zam0825

    第5楼2008/01/24

    原帖已经写了,以酪氨酸为底物。

    zhouyuhu 发表:您的底物是什么,按照米氏方程得出的结论,上大学学过,现在还给老师了

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  • 燕子haha

    第6楼2013/10/09

    楼主 你好,想请教一下以酪氨酸为底物测定酪氨酸酶的话,底物浓度和量是怎么确定的?

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  • Spain

    第7楼2013/10/10

    IFCC不是有类似的标准规程吗?

    我感觉就是仪器动力学扫描,得到吸光度的变化率,除以时间,结果再乘以个系数。

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