阿du 2008/02/02
[quote]原文由 [B]115586852[/B] 发表: 请问，要是等度的，是不是也要用水和甲醇啊，配的比例怎么配啊100克的为准，甲醇20，水8对吗，然后一个瓶子对吗？？ 关键是如果用两个瓶子，应该怎么操作啊 。[/quote] 具体用什么流动相看你的分析规程了，规定用什么就按照去配制。 一般比例按照体积比去配，比如20/80的甲醇/水溶液，量取800毫升的纯水，再量取200毫升的甲醇加入混合均匀，然后脱气（或根据需要过滤）就配成了1000毫升（甲醇：水=20：80）的流动相。
活到九十 学到一百 2008/02/02
还有一个方法，你在论坛里搜索一下，看看有没有本地的版友，可以现场给你指点一下
无名 2008/02/02
1、清除泵内的空气，请问对泵内的脱气处理时如何进行的？ 答:流动相充满泵体空间,不存在脱气的问题;为了减少流动相中可溶气体的影响,一般加在线脱气装置,对于单元系统,一般推荐流动相临用前微孔过滤脱气. 2、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]的色谱柱反相是什么意思啊？ 答: 反相键合相色谱法 典型的反相键合色谱法是用非极性固定相和极性流动相组成的色谱体系。固定相，常用十八烷基（ODS或C）键合相；流动相常用甲醇-水或乙腈-水。非典型反相色谱系统，用弱极性或中等极性的键合相和极性大于固定相的流动相组成。 (1) 分离机制 反相键合相表面具有非极性烷基官能团，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性能，剩余硅醇基的多寡，视覆盖率而定。简要介绍疏溶剂理论。 疏溶剂理论：当一个非极性溶质或溶质分子中的非极性部分与极性溶剂相接触时，相互产生斥力，自由能（G）增加，熵减小，不稳定性增加。根据热力学第二定律，系统由不稳定到稳定是自发的，即熵增加是自发的。因此，为了弥补熵的损失，溶质分子中非极性部分结构的取向，将导致在极性溶剂中形成一个“容腔”，这种效应称为疏溶剂或疏水效应。该理论认为，在键合相反相色谱法中溶质的保留主要不是由于溶质分子与键合相间的色散力，而是溶质分子与极性溶剂分子间的排斥力，促使溶质分子与键合相的烃基发生疏水缔合，且缔合反应是可逆的。容量因子k与自由能变化△G的关系如下式： lnk＝lnV/V－△G/RT (8·5) 上式中的R为理想气体常数、T为热力学温度、V是色谱柱中键合相表面所键合的官能团的体积，V是色谱柱中流动相的体积。该式说明△G越大，被分离组分的k越小，保留时间越短。 (2)★★流动相的极性与容量因子的关系 流动相的极性增大，洗脱能力降低，溶质的k增大，t增大；反之,k与t减小。分离结构相近的组分时，极性大的组分先出柱。 (3) 特点 反相色谱法是应用最广的色谱法，主要用于分离非极性至中等极性的各类分子型化合物，因为键合相表面的官能团不流失，溶剂的极性可以在很大范围内调整，因此应用范围很宽。由它派生的反相离子对色谱法与离子抑制色谱法，可以分离有机酸、碱、盐等离子型化合物。用反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法，可以解决80%左右的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]课题。因此，必须给予反相色谱法足够的重视。对于结构异构体等难分离物质的分离，则应选用吸附色谱法。 3、流动相由几个组成部分，是蒸馏水和HPLC专用甲醇两个吗？或者有更多的？答:蒸馏水和甲醇只是通常的流动相组成,其他很多液体都可能被用到,典型的有机流动相组分如甲醇/乙腈/四氢呋喃等很多种,借用层析中的定义: 层吸液主要由对物质有不同溶解能力的两种或几种液体组成，通过固相支持物对层吸液中不同液体吸附能力不同，用于分离物质的液体。 4、大家给我一个整套的详细的HPLC操作，理论图文并茂的资料. 答:这个问题其实版面有很多的答案,最简单的推荐wufeng论坛的wsy18提供的资料 http://www.instrument.com.cn/bbs/forum_500.htm 那里有许多flash的教学材料
sun-sd 2008/02/02
[quote]原文由 [B]115586852[/B] 发表: 7楼的，我现在就 想知道，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]肯定用流动相吧，换句话说：在HPLC上面的方的几个瓶子，是不是同时用的还是说：就用两个瓶子就行了，一个是蒸馏水，一个甲醇等，是不是就用这两个啊[/quote] 看你仪器的配置：等度仪器每次用一个，如果是梯度，几元梯度就同时用几个。
eleven22811 2008/02/02
http://www.xauat.edu.cn/ex/tsinghua/software/08/09/001/01/00001/8_ye/8_1_01.htm 很理论的资料，而且讲的不错。
无名
第1楼2008/02/02
1、清除泵内的空气，请问对泵内的脱气处理时如何进行的？
答:流动相充满泵体空间,不存在脱气的问题;为了减少流动相中可溶气体的影响,一般加在线脱气装置,对于单元系统,一般推荐流动相临用前微孔过滤脱气.
2、液相的色谱柱反相是什么意思啊？
答:
反相键合相色谱法
典型的反相键合色谱法是用非极性固定相和极性流动相组成的色谱体系。固定相，常用十八烷基（ODS或C）键合相；流动相常用甲醇-水或乙腈-水。非典型反相色谱系统，用弱极性或中等极性的键合相和极性大于固定相的流动相组成。
(1) 分离机制 反相键合相表面具有非极性烷基官能团，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性能，剩余硅醇基的多寡，视覆盖率而定。简要介绍疏溶剂理论。
疏溶剂理论：当一个非极性溶质或溶质分子中的非极性部分与极性溶剂相接触时，相互产生斥力，自由能（G）增加，熵减小，不稳定性增加。根据热力学第二定律，系统由不稳定到稳定是自发的，即熵增加是自发的。因此，为了弥补熵的损失，溶质分子中非极性部分结构的取向，将导致在极性溶剂中形成一个“容腔”，这种效应称为疏溶剂或疏水效应。该理论认为，在键合相反相色谱法中溶质的保留主要不是由于溶质分子与键合相间的色散力，而是溶质分子与极性溶剂分子间的排斥力，促使溶质分子与键合相的烃基发生疏水缔合，且缔合反应是可逆的。容量因子k与自由能变化△G的关系如下式：
lnk＝lnV/V－△G/RT (8·5)
上式中的R为理想气体常数、T为热力学温度、V是色谱柱中键合相表面所键合的官能团的体积，V是色谱柱中流动相的体积。该式说明△G越大，被分离组分的k越小，保留时间越短。
(2)★★流动相的极性与容量因子的关系 流动相的极性增大，洗脱能力降低，溶质的k增大，t增大；反之,k与t减小。分离结构相近的组分时，极性大的组分先出柱。
(3) 特点 反相色谱法是应用最广的色谱法，主要用于分离非极性至中等极性的各类分子型化合物，因为键合相表面的官能团不流失，溶剂的极性可以在很大范围内调整，因此应用范围很宽。由它派生的反相离子对色谱法与离子抑制色谱法，可以分离有机酸、碱、盐等离子型化合物。用反相液相色谱法，可以解决80%左右的液相色谱课题。因此，必须给予反相色谱法足够的重视。对于结构异构体等难分离物质的分离，则应选用吸附色谱法。
3、流动相由几个组成部分，是蒸馏水和HPLC专用甲醇两个吗？或者有更多的？答:蒸馏水和甲醇只是通常的流动相组成,其他很多液体都可能被用到,典型的有机流动相组分如甲醇/乙腈/四氢呋喃等很多种,借用层析中的定义:
层吸液主要由对物质有不同溶解能力的两种或几种液体组成，通过固相支持物对层吸液中不同液体吸附能力不同，用于分离物质的液体。
4、大家给我一个整套的详细的HPLC操作，理论图文并茂的资料.
答:这个问题其实版面有很多的答案,最简单的推荐wufeng论坛的wsy18提供的资料
http://www.instrument.com.cn/bbs/forum_500.htm
那里有许多flash的教学材料
阿du
第3楼2008/02/02
楼上回答的很详细了。
俺也说两句：
1.流动相在使用前都要脱气，你可以用超声波脱气或滤膜抽滤脱气，或者用在线脱气机（那你就省事了）。一般刚开机后你需要冲一下管路里的空气，打开排空阀，按PUGE或设定大流速冲洗几分钟就可以了（冲洗前一定要打开排空阀，否则压力太高会损坏泵和柱子）。
2.反相色谱，就是使用中流动相的极性高于柱子的极性。一般柱子填料是长联烷基键合，流动相使用甲醇乙腈水等极性流动相。
3.流动相，反相柱用甲醇乙腈/水体系的比较多，当然还有THF、异丙醇等等，水要求纯水，试剂要求HPLC 级，水相里还经常会用到缓冲盐、磷酸等控制流动相的PH范围。正相柱一般用正庚烷、正己烷等等为流动相。流动相配好后要过滤，以免杂质颗粒损伤仪器和柱子。
4.操作教材，论坛里多的很，多看看多找找，从基础看起，自己在结合动动手就OK了。
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