【求助】用Agilent的二级质谱测样，内标面积不稳！

测什么样品啊？什么模式？质谱条件都优化好了？

我的内标是大黄素，质谱条件有文献报道的，当时也优化过，用的是MRM模式。。。

这个问题有点意思呀，以前我也碰到过。

首先，我们需要搞清楚的是，你用MRM来做，内标是用到2个Transition，还是3个，就是你的内标定量子离子和辅助定性子离子的峰面积都变吗？

从你的表述中应该是内标的Quantitive子离子的峰面积在变化，不知道你有没有观察到内标定量和定性子离子的面积比率Ratio有没有变化呀，

1. 如果还是没有变化的话，还是和你以前做的Ratio一样的话，我推荐你考虑一下你uplc的自动进样器是否有问题了，如果你用的是1200 RPLC的话最有可能出现的问题是针座那里堵塞。

2.如果他们之间面积Ratio的比率变化很厉害，这一点也很好判断，相信楼主会从Musshunter的处理结果上看到Ratio那一结果栏都是红色。提示你超限了。这样的问题你可以考虑一下重新调谐一下你的质谱，Autotune，一般安捷伦64**系列的三重四级杆质谱，只能分辨出m/z差0.5，当你选择的监控荷质比与实际的相差大于0.5时候，会丢掉很大的响应的。

另外一点，如果你标准品的内标定量离子响应很稳定，只是样品中的变化很大的话，那么就考虑一下基质的影响吧，matrice有时候是一个很大的影响因素。

现在样品的变化不大，只是内标的变化太大。我的内标只选了一个子离子啊。进样器是1290的。我都是拿那个定性的工具包处理的数据，定量的那个不怎么会用。。。

先进呀，1290比1200 RPLC更好呀，样品变化不大，只有内标变化大的话，那就重新优化条件吧，可能是仪器的响应有问题，另外，可能是你内标的Spike是否有问题。

另外，我建议你增加一个Transition呀，干嘛MRM只做一个监控呀，这样没有辅助定性离子很难判断你的内标是否准确呢。你重新做一下内标的Product Ion找一下响应最好的两个子离子吧。

Musshunter的定量软件很简单呀，你还是用那个做数据分析吧，会得到很多的信息，帮助你找到问题在哪里。下面我给你接一个图看看。



你可以看到我右下角标准曲线里的绿色点是内标响应面积，也不是很稳定，但是我样品可能也跟着内标的响应量一起增加或者减少，最后生成的标准曲线没有太大的问题，定量也不会有问题。左下角我是选择了两个transition帮助我准确定性我要分析的物质。