【求助】SPE回收率太高，急

给你一篇文献，仅供参考。
　　己烯雌酚（Diethylstilbestol）是一种人工合成的非甾体雌激素，别名人造求偶素，无色结晶性粉末，能溶于甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、脂肪油、强碱溶液中，几乎不溶于水。因其能促进蛋白合成，加快增重和骨骼钙化，并减少饲料消耗，被用作鸡、牛、羊促长增肉剂;同时在水产养殖、丰胸化妆品等方面也有使用。己烯雌酚的残留会给消费者带来不良的生理影响（儿童性发育异常、男性出现女性体征），会损害肝肾功能，或认为使用己烯雌酚与阴道腺癌、女性乳腺癌发生率有一定关系。许多国家禁止食品中使用己烯雌酚，我国1999年开始禁止使用己烯雌酚。据文献介绍，测定己烯雌酚有酶联免疫测定法、放射免疫法、GC法 ［1］ 、TLC法、GC-MS法和HPLC法 ［2］ ，本文运用HPLC法测定畜禽肉及内脏中己烯雌酚，取样5g时，最小检出浓度0.24mg/kg:加标回收率分别为98.7%～104.3%，99.6%～101.7%;精密度RSD<5%。


　　1 材料与方法


1.1 仪器


　　日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，配带二极管阵列检测器;离心机（4000r/min），超声波清洗器、美国密理博超纯水系统、CHA-S恒温振荡器。


1.2 试剂


　　己烯雌酚标准购自美国SIGMA公司，纯度大于99%;甲醇（色谱级）、磷酸二氢钠（NaH 2 P0 4 .2H 2 O）（分析纯）、磷酸（分析纯）。


1.3 样品


　　猪肉、鸡肉、牛肉、猪肝、鸡肝、猪腰等随机购自各超市、市场。


1.4 色谱条件


　　色谱柱:Agilent SB-C 18 （5μm）4.6mm×150mm不锈钢柱;检测波长:230nm;流动相:甲醇+0.043mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH=5）;流速:1ml/min;进样量:20μl;柱温:室温。


1.5 样品处理


　　称取绞碎样品约5.00g于50ml塑料离心管，加入10.00ml甲醇，搅拌，振荡20min，3000r/min离心10min，将上清液吸出;残渣再加入10.00ml甲醇按同样方法处理，合并上清液，0.45μm滤膜过滤，备用。


1.6 标准曲线


　　己烯雌酚标准贮备液浓度为1.0mg/ml甲醇溶液，以标准加入法配制标准曲线。称取5份同样的绞碎样品（约5.00g每份），放入50ml塑料离心管，分别加入6.0、12.0、18.0、24.0μg/ml己烯雌酚标准液各1.0ml，同时做空白。按1.5处理方法提取，其中甲醇总量为20.00ml，配制浓度为0.00、0.30、0.60、0.90、1.20μg/ml标准系列溶液。以浓度（μg/ml）对峰高绘制工作曲线。回归方程y=5304.667x-64.000，相关系数r=0.9996，呈良好的线性关系。


　　2 结果


2.1 以标准物质的保留时间定性，保留时间为4.637;以浓度（μg/ml）对峰高绘制工作曲线进行定量。标准及样品色谱图分别见图1和图2。


2.2 精密度试验


　　取三种不同浓度标准溶液按样品处理方法提取后，进行6次测定，测得变异系数结果见表1。


2.3 准确度试验


　　称取2份相同空白样品（约5.00g每份），加入二种不同浓度的标准溶液，按样品处理方法提取后使其测定浓度为0.30μg/ml和0.90μg/ml，分别测得回收率结果见表2。表1 精密度测定结果（略）表2 回收率结果（略）

2.4 检出限及线性范围


　　按检出限=3N/b（N:仪器噪声水平，b:标准曲线回归方程中的斜率）计算，本方法取样5g时，最小检出浓度0.24mg/kg;方法灵敏度不太高。如有条件采用固相萃取（SPE）、超临界流体萃取（SFE）或基质固相分散（MSPE）等技术进行样品处理，可降低检出限，增加灵敏度。在0.06～1.20范围内呈良好线性关系。

2.5 实际样品测定


　　在超市、市场购得样品用本方法进行实际测定，样品包括肉（猪肉、鸡肉、牛肉）及内脏（猪肝、鸡肝、猪腰）共57份，在2份牛肉中检出己烯雌酚，残留量分别为0.696mg/kg、1.46mg/kg。


　　3 讨论


3.1 流动相pH值对保留时间影响


　　用磷酸调流动相pH值时，如用pH试纸指示酸碱度，每次所配的流动相pH值会存在一定差异，更换流动相后样品分析的保留时间会出现差异。因此，建议在用磷酸调流动相pH时，第一次用pH酸度计定位，记录配制500ml或1000ml流动相需加入磷酸的量，在以后的流动相配制中按体积加入相应的磷酸量，以保证pH值的一致性，减少保留时间的漂移。


3.2 应用标准加入法配制标准曲线可以减少基体的干扰，使样品的测定值更加准确，但该方法只适合单一样品的分析，如果同时进行多种基体样品（如:猪肉、鸡肉、牛肉）的分析时，则需不同基体均配制标准曲线，实际工作中操作不方便。本方法样品经两次甲醇提取、离心、过滤后，样品得到一定的净化，在多样品分析时建议采用直接配制标准曲线法进行定量。直接配制浓度为0.00、0.30、0.60、0.90、1.20μg/ml标准系列溶液，以浓度（μg/ml）对峰高绘制工作曲线，样品测得峰高从该工作曲线查得相应含量。

　　3.3 用HPLC法（Agilent SB-C 18 色谱柱）测定己烯雌酚简便快捷，有较好的精密度和准确度，较适用于畜禽肉及内脏类样品的测定。


　　参考文献:

　　［1］韩见龙.毛细管气相色谱法测定肉类食品中游离己烯雌酚的残留量［J］.中国卫生检验杂志，2004，14（6）:726～728.


［2］食品卫生检验方法.理化部分（二）（GB/T5009-2003）［S］.北京:中国标准出版社，2004，37～38.

衍生问题,由于杂质引起衍生测定成倍提高.

我使用的是硅烷化衍生，如果是杂质对衍生化的影响，为什么会有这么大的影响，你有具体的例子吗？