【转帖】蜡类样品中有机色素测定 薄层色谱法

5 分析步骤

5.1 样品预处理(1)

5.1.1 称取样品20.0～50.0g于烧杯中,加乙醇20～50ml,在水浴(60～70℃)中加热,充分搅拌溶解。此溶液用保温漏斗乘热过滤（2），滤液移入离心管中，放入冷水（约5℃）中冷却20min后离心10min（3500～4000r/min），小心过滤上清液。向离心管内的残留物中加乙醇20～50ml，于水浴（60～70℃）中加热溶解，放入冰水（约5℃）20min后离心约10min（3500～4000r/min），必要时过滤上清液。再向离心管中加乙醇20～50ml，反复上述操作，直至乙醇几乎不显色为止，合并全部乙醇取液，在水浴上蒸发乙醇近干，此为残留物（Ⅰ）。

烧杯内和滤纸上的残留物，分别用少量的四氯化碳提取，合并提取液，蒸发甲氯化碳，残留物用少量α-氯萘加热溶解，过滤，为待测溶液A。

向1体积待测溶液A或B中加入5体积的石油醚，冷处放置3～4小时，使色素析出，弃去上清液。残留的色素加少量的α-氯萘，加温溶解，冷后，此液按1体积加5体积的石油醚，与前述同样处理，所得色素，再用α-氯萘溶解，作为吸收光谱用待测溶液A。

5.1.3 残留物(Ⅰ)或(Ⅱ),溶于100ml苯中,移入300ml分液漏斗中,加硫酸 乙酸 水混合溶液(3.1)20～30ml振荡(4)。反复此操作3次，以提取色素。合并提取液，加等体积的水，边冷却边小心加入25%氢氧化钠溶液至呈弱碱性。冷后，将此溶液移入分液漏头中，此时如有不溶物，亦一并移入分液漏斗中（5）。每次加约1/4体积的石油醚，连续提取2～3次，合并全部石油醚提取液，水洗后，蒸发石油醚。残留物溶于苯中，使成适当浓度，作吸收光谱、滤纸层析和薄层层析用的待测溶液B。但当有二种以上的色素混合物时，应按“一、混合焦油色素的测定”中待测溶液C项的柱层析法进行，吸附剂用硅胶，展开剂用苯展开并将色素溶出液分别作可见光吸收光谱用，滤纸层析和薄层层析用的造就则溶液是C（苯溶液）和D（氯仿溶液）。

5.2 测定

5.2.1 吸收光谱法：测定待测溶液A的可见光吸收光谱，与黄色404号比较、判定。（6）

测定待测溶液B的可见吸收光谱，与黄色404号、黄色405号、黄色204号、绿色202号和蓝色403号的吸收光谱比较、判定。（7）

测定待测溶液C的可见光吸收光谱，与黄色404号、黄色405号、绿色202号和蓝色402号的吸收光谱比较、判定。

测定待测溶液D的可见光吸收光谱，与黄色204号的吸收光谱比较、判定。

5.2.2滤纸层析法：用上述方法不能分辨黄色404号或黄色405号时，则取待测溶液。或C（必要时，配制造当浓度的色素）按“一、混合焦油色素的测定”中待测溶液A的滤纸层析法进行分离鉴定。但是，色素标准溶液用3.6.2，展开剂用3.4.1和3.4.2。

5.2.3薄层层析法：用待测溶液B、C和D，进行薄层层析，条件如下：

吸附剂：硅胶厚250～300μm。

活化条件： 100℃， 60min。

展开剂：用3.5.1,3.5.2和3.5.3。

展开距离：约100mm。
将待测溶液B、C和D及色素标准溶液3.6.2或3.6.3，分别点在同一薄层板上，用展开剂3.5.1，3.5.2和3.5.3展开。