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【讨论】紫外分光光度法测定蛋白质含量de问题？

云中漫步

2008/04/04

紫外可见分光光度计（UV）

实验原理
本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同的蛋白质吸收波长略有差别）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。

仪器与试剂
紫外-可见分光光度计，比色管，吸量管
标准蛋白质溶液：5.00 mg.mL-1溶液，0.9% NaCl溶液，待测蛋白质溶液

实验步骤
1. 标准曲线的制作：
用吸量管分别吸取1.0 、1.5、 2.0 、2.5 、3.0 mL 5.00 mg.mL-1标准蛋白质溶液于5只10 mL 比色管中，用0.9% NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液为参比，在280 nm处分别测定各标准溶液的吸光度A280，记录所得读数。
2. 样品测定：
取待测蛋白质溶液3 mL，按上述方法测定280 nm处的吸光度。平行测定三份。

数据处理
1. 以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
2. 根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。

注意事项和问题
1. 紫外吸收法与Folin-酚比色法测定蛋白质含量相比，有何缺点及优点？
2. 若样品中含有核酸类杂质，应如何校正？

精
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云中漫步

第1楼2008/04/04

没做过蛋白质

酪氨酸275nm和色氨酸280nm，那么本实验测定的蛋白质应该是两者之和吗？

0

精
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初学者&九点虎

第2楼2008/04/05

蛋白质是一个大类,里面还有很多细分,楼住所说的蛋白质标准溶液指什么?

0

bszcb

第3楼2008/04/05

建议看一下考玛斯亮蓝法的教科书

0

初学者&九点虎

第4楼2008/04/05

我们一般都用开始定单法测定粗蛋白,这种方法还真没有用过
bszcb 发表:建议看一下考玛斯亮蓝法的教科书

0

raynortft

第5楼2008/04/05

标准曲线法？？

0

yhsun

第6楼2008/04/05

本法是测蛋白质的粗略方法,核酸是在260nm测定.

0

liu999999

第7楼2008/04/07

没见过该方法介绍。

0

chaoren0657

第9楼2008/04/07

感谢分享~！！！

0

zhuxiugao

第10楼2008/04/07

楼主是做食品的？

0

kangfuxing

第11楼2008/04/07

这个方法容易被核酸干扰，而且测定混合有机成分时，极不准确。

0

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