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【讨论】朗伯-比尔定律一定要在最大吸收波长处才能成立吗

  • vicou_chen
    2008/04/08
  • 私聊

紫外可见分光光度计(UV)

  • 大家好!俺最近正在用考马斯亮兰试剂进行肝脏微粒体蛋白的浓度测定,文献上说标准牛血清蛋白和考马斯亮兰试剂结合后在595nm处有最大吸收,本人亲自试着扫描了一下,最大吸收波长在598nm,而微粒体蛋白和考马斯亮兰试剂结合后的最大吸收波长在601nm左右,就上面这种情况,如果我要进行蛋白浓度的定量分析时该选择哪个波长来进行呢?
    再者一直很困惑,一般看到文献上进行紫外测定时都是选择物质的最大吸收波长处的吸收,那如果选择其他波长来测定是否可行?盼高手指教!
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  • 初学者&九点虎

    第1楼2008/04/08

    为什么很多书上说在最大吸收波长处测定呢,因为在最大吸收波长处,误差最小。这种理论已经有好几十年了吧,现在仪器的发展日新月异,所以用旧理论来衡量现在的实验,稍微有点过时,但肯定是对的。
    楼住的问题,在别的波长处,肯定满足比尔定律,如果仪器好,不在最大吸收处测定,误差也不是很大。
    还有,由于种种原因,可能出现与文献的报道不一样的最大吸收,没关系的。如果你的标准品最大吸收和文献一样,那就用文献的,如果不一样,就用自己的。但如果用摩尔吸收系数法,只能用文献的了,自己去算别的波长处的摩尔吸收系数,比较麻烦,也没有必要

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  • langsbb

    第2楼2008/04/08

    我试过的,在最大吸收波长附近都成线性,但选择最大吸收波长可以保证测定灵敏度最好。
    不同的检测方法对波长的选择有一定出入应该是考虑到干扰的问题吧。
    以个人愚见,在保证线性的前提下,做加标回收率试验,选回收率最好的

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  • 高卧东山

    第3楼2008/04/08

    朗伯比尔定律的成立与吸收峰没有关系,影响其成立的主要因素在于物质浓度、散射等

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  • tm123

    第4楼2008/04/08

    在低峰测也可以的

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  • 云燕

    第5楼2008/04/08

    在保证线性的前提下,选择的波长不一定是最大吸收波长的。只要在此波长下其它物质没有 吸收 干扰就行。

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  • chy813

    第7楼2008/04/08

    也就是消除干扰.

    angles-chen 发表:在保证线性的前提下,选择的波长不一定是最大吸收波长的。只要在此波长下其它物质没有 吸收 干扰就行。

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  • vicou_chen

    第8楼2008/04/09

    谢谢各位的意见!学习了

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