calfstone 2008/05/22
[quote]原文由 [B]hotdoglet[/B] 发表: 目前农残检测中一般都需要使用校准曲线进行定量分析,校准曲线是由一系列的标准配制成的,在线性范围内,利用浓度与峰面积等进行最小二乘法拟合得到的线性关系,从而对样品中的目标物进行定量。[color=#DC143C][U]那么在线性范围内的各个浓度应该如何分布,才能使校准曲线更合理、得到的定量结果更加准确?[/U][/color]希望大家多多的分享实际工作中的经验。[/quote] 任何科学实践必须有科学理论的支撑。在这个意义上讲,经验有时候是一种误导。在寻求某个困扰自己的问题答案的时候,我提倡用理论 支撑的观点来表达自己和说服自己。任何的盲从和权威都是不可取的。标准曲线的做法问题也是如此。 1、标准曲线的本质。标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的函数关系。建立标准曲线的目的是推导待测物质的理化属性 。如果有不需要标准曲线的方法,比如绝对校正,我想大家都会高兴。 2、标准曲线的适用性。这是做标准曲线的重要前提,这个问题实际很简单,就是这样一个问题:我的样品的仪器响应能否用我们所建立的 标准曲线来推导其理化属性?答案建立在仪器响应的特异性和标准系列和样品的匹配性上面。一方面我们总是力求仪器的响应对于标准和 样品是一视同仁;同时我们也要求我的样本跟标准基体匹配。所以最好的标准是基体匹配标准,最好的标准曲线是工作曲线。这样,我们 也很好理解为什么大多数分析要求标准曲线和样品同批测定(除非经过实验,标准曲线的变化不大),同样的道理也可以理解为什么我们 在做大批量检测的时候要插入QC检验样本,以考察仪器的稳定性。即使在任何信息未知的情况下,我们还是要做我们的分析测试的(要不 ,我们都失业了),因为大家都是用同样的方法做,要错大家一起错;同时也因为我们相信伴随科学的进步,我们所测试的结果的准确性 就越接近真理。 3、简单的标准曲线----单点校正。对于分析成本高的测试,单点校正是不得以的选择。现在应用最多的是色谱分析,很多国家标准或国际 标准都采用单点校正,实际是建立在色谱分析的高选择性上面:我们的空白一般都很小,我们的线性一般都很好。在有这么多验前概率的 支撑下,色谱分析中大量的单点校正不失为一个合理的选择。但单点校正要丢失很多的信息量,这个信息量就是不确定度。 4、标准曲线的点的分布。从不确定度理论推算样本的不确定度时,有二个重要的结论:一、标准曲线的重心点处,所查出来的样品不确定 度最小。二、标准的点数越多,样品的不确定度越小。基于这两个结论的标准曲线的做法应该是:在样品浓度的附近尽量的多布标准点。 点做多做少,点分布如何,影响的是标准曲线所查出来的样品的理化属性的不确定度。好的测量应该是不确定度小的测量,这在判断样品 的结果是否超标或符合限值的时候至关重要。 关于标准曲线的其他问题,参见我的帖子: http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20080317/1191805/
木头 2008/05/23
国标方法的话一般是五个点(不包括零浓度); 一般以检出限的5~10倍为第一个点,以后根据1倍(或接近一倍)递增,最高浓度是最低浓度的10~20倍为宜。当然,要根据仪器的灵敏度来调整。 一般方法要求线性大于0.99,其实〉0.99是判断是否为线性相关的一个标准,实际应用中线性 〉0.999才是比较理想的。线性在0.99到0.999之间的监测结果只用接近最高浓度一半(中间浓度)的位置才比较准确,如果线性大于0.999的话,在整个线性范围内都会有一个比较满意的结果。 如果检测的线性不好,可以减少标准的覆盖范围,将标准的浓度调整到待测样品浓度附近,这样结果也是非常准确的。例如,样品的浓度约20ppb,但在0~50ppb范围建立标准曲线,但线性非常不理想,这时可以将标准范围调整到15~25ppb之间,作五个标准。
阿峰 2008/05/23
1。标准曲线要在常用浓度范围。 2。窄的区间,对测试来讲越有利。 3。一定在线性范围内。 4。点的分布要均匀。
尐虎ル)ㄣ灬 2008/05/24
[quote]原文由 [B]hotdoglet[/B] 发表: 目前农残检测中一般都需要使用校准曲线进行定量分析,校准曲线是由一系列的标准配制成的,在线性范围内,利用浓度与峰面积等进行最小二乘法拟合得到的线性关系,从而对样品中的目标物进行定量。[color=#DC143C][U]那么在线性范围内的各个浓度应该如何分布,才能使校准曲线更合理、得到的定量结果更加准确?[/U][/color]希望大家多多的分享实际工作中的经验。 [color=#00008B]注,大家可以看看17楼[B]calfstone[/B]朋友的解释。[/color][/quote] [size=4]一.线性关系.现在一般都是用软件.一般要求在0.99以上 二.标准品.一般加上空白.要求在5个点以上(不是越多真好,在五个或六个就可以)(可用二倍或三倍的梯度来选点) 三.IC50要正常 四.曲线的拐点数:三个以内为正常.二个比较好一些 五.校准:可以跟据上边的一些参数.看看那个点远离了,可进行单点校准. 六:分析结果:在求将报测定的结果分布于曲线的第二个点以后,第四个点之上 第曲线的前边或后边的变异比较大,对做重复实验不利. 个人经验只供参考.[/size]
loacao 2008/05/26
我想根据自己的经验,总结一下标准曲线通常应注意的问题,以求对关键点进行控制: 1.范围:如前面的朋友们所说不能跨度太大,因为标准曲线的高浓度延长线通常是曲线,那样定量会不准。最小点当然可以从LOQ开始。 2. LOQ:对于样品中所含待测物浓度接近或低于最低定量限的,应用LOQ单点校正(欧盟QC规定)。 3. 线性r:对于R值,欧盟没有明确说明,一般质谱中定量用0.99以上才可以接受。 4. 点数:三个以上,多者不限。目前大家都按照梯度配制,是因为便于逐级稀释标样。 5. 原点:一定要注意,标准曲线不一定过原点,尤其是无法获得基质空白的时候。 6. 是否单点校正:一般的说法是通常仪器稳定,认为曲线稳定,所以省略为单点校正。根据欧盟的QC,是可以接受的,但要注意,每隔一定时间考察一下曲线的稳定性。 没有提到的,请大家补充。