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【求助】Agilent1100 检测蛋白没有峰怎么回事?

液相色谱(LC)

  • 各位老师大家好,我刚接触使用Agilent 1100系统检测蛋白,用的是Agilent Zorbax GF-250的柱子,1100进样是用的手动进样器。有个很奇怪的现象,用相同的标准品(蛋白marker),在load状态下进样4~5次,每次进样20ul,inject后平均只有一次有峰,其余的都没有任何峰出现。
    因为样品是糖蛋白,纯化损失很大得率很小,所以在没搞清楚前不敢随便浪费,还希望有经验的老师不吝赐教!谢谢了!
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  • 爱杰杰

    第1楼2008/09/25

    你们是做含量还是分子量啊?
    还有,你的定量环是多大的?20ul的定量环只能准确进样10ul以下,想准确进样20ul需要进100ul左右才行

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  • It is me!

    第2楼2008/09/25

    有可能蛋白还在柱子上没有下来,你可以尝试一下其他条件。或者干脆就清洗柱子,再看看有没有蛋白下来。。。
    我估计蛋白在柱子上没下来。

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  • liugy04

    第3楼2008/09/25

    测定纯度和分子量,用的20ul的上样环,问题是每次进样量相同,方法也是一样,进同样的东西有时有峰有时没峰,因为浓度高峰还挺大。

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  • liugy04

    第4楼2008/09/25

    这个可能性倒是没考虑过,不过凝胶过滤的柱子回收率应该挺高的

    hmzhou83 发表:有可能蛋白还在柱子上没有下来,你可以尝试一下其他条件。或者干脆就清洗柱子,再看看有没有蛋白下来。。。
    我估计蛋白在柱子上没下来。

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  • liugy04

    第5楼2008/09/25




    测定纯度和分子量,用的20ul的上样环,问题是每次进样量相同,方法也是一样,进同样的东西有时有峰有时没峰,因为浓度高峰还挺大。

    zhchen1130 发表:你们是做含量还是分子量啊?
    还有,你的定量环是多大的?20ul的定量环只能准确进样10ul以下,想准确进样20ul需要进100ul左右才行

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  • BBN007

    第6楼2009/03/31

    调整流动相的比例,把样品溶液浓度加大,把定量环改成200uL,我原先做过G-CSF纯度,按上面提到的逐项改变,试一试。

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