【原创】谁能告诉我如何使用AB3200或4000建立方法？

论坛版主招募|新窦 2008/10/15

API4000定量分析方法的建立： 一、Q1 scan 　　1、用手动注射泵进样，流速设5ul/min，标准样浓度约1pmol/ul； 　　2、初调GS1和DP（使喷雾平稳、分析化合物信号灵敏度较高），GS1一般从10开始，一般用14。 　　3、Acquire采集并保存Q1MS做1.5分钟，确定化合物的母离子，（一定要找准，精确至小数点后一位数） 二、product ion 　　1、手动调节CE参数，使母离子具有一定强度，一般以母离子的强度占图谱中基峰强度的1/3到1/4为宜。 　　2、点击Acquire,采集并保存MS2，确定化合物的子离子：在质谱图区域，点击右键“Open File”打开图谱，选择2个最高响应值的子离子，局部放大，确定子离子的质荷比，准确到0.1amu(以半峰宽为准) 三、MRM优化 　　以前两步选好的母离子、子离子组成离子对输入到右边的表格中，做MRM Scan,每个离子对的分析时间设100或200ms。（几对离子可同时优化） 　　通过Edit Ramp,分别优化Compound项下的各参数，如DP、EP、CE、CXP。 　　1、先优化DP找出各对离子的最好的DP值； 　　2、将每对离子的DP值增加填入右边的表格中，然后优化CE找出各对离子最好的CE值； 　　3、将每对离子的CE值增加填入右边的表格中，然后再对DP进行优化，将表格中第一次的DP值进行修改； 　　4、修改过DP值后再对CE进行一次优化并将新的CE值填入表格中； 　　5、对每对离子的EP进行优化； 　　6、对每对离子的CXP进行优化； 　　7、保存MRM方法。 四、将MRM方法转化为LC-MS/MS方法 　　1、连接[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]后将现有的质谱体系deactivte激活LCMS，打开先前保存的MRM方法，右键显示方法左边导引条中第一行Acquire Method，点击Add/Remove Device Method添加泵、自动进样器等相关模块，选中方法左边导引条中第一行Acquire Method参数页，设置色谱同步（LC SYNC）。 　　2、设置色谱参数，分析时间一般为0.8-1.0min，流动相组成和流量与实际样品分析时相同；修改质谱分析时间（Duration,一般设置0.8-1.0min，）与色谱参数一致；设置GS1、GS2、TEM初始值为40、40、500左右，保存方法。 　　3、将化合物溶液稀释100-1000倍，在Tune模式下，双击Quantitative Optimization,选择FIA分析，根据向导进行自动优化。 　　4、将FIA自动优化后的最优的GS1、GS2、TEM值填入方法中。 五、色谱条件优化 　　接好色谱柱，关掉Tune，在Acquire栏下调出上一步优化好的方法，根据色谱柱规格和待分析体系的复杂程度设置[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]流动相比例及分析时间和质谱分析时间，或编辑洗脱梯度，保存方法。 参考资料：[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=112673]LC-MS/MS定量分析一般步骤-李立军[/url] API3200应该步骤也差不多，欢迎大家修正及补充……

风之彩 2008/10/16

[quote]原文由 [B]capinter[/B] 发表: API4000定量分析方法的建立： 一、Q1 scan 　　1、用手动注射泵进样，流速设5ml/min，标准样浓度约1pmol/ul； 　　2、初调GS1和DP（使喷雾平稳、分析化合物信号灵敏度较高），GS1一般从10开始，一般用14。 　　3、Acquire采集并保存Q1MS做1.5分钟，确定化合物的母离子，（一定要找准，精确至小数点后一位数） 二、product ion 　　1、手动调节CE参数，使母离子具有一定强度，一般以母离子的强度占图谱中基峰强度的1/3到1/4为宜。 　　2、点击Acquire,采集并保存MS2，确定化合物的子离子：在质谱图区域，点击右键“Open File”打开图谱，选择2个最高响应值的子离子，局部放大，确定子离子的质荷比，准确到0.1amu(以半峰宽为准) 三、MRM优化 　　以前两步选好的母离子、子离子组成离子对输入到右边的表格中，做MRM Scan,每个离子对的分析时间设100或200ms。（几对离子可同时优化） 　　通过Edit Ramp,分别优化Compound项下的各参数，如DP、EP、CE、CXP。 　　1、先优化DP找出各对离子的最好的DP值； 　　2、将每对离子的DP值增加填入右边的表格中，然后优化CE找出各对离子最好的CE值； 　　3、将每对离子的CE值增加填入右边的表格中，然后再对DP进行优化，将表格中第一次的DP值进行修改； 　　4、修改过DP值后再对CE进行一次优化并将新的CE值填入表格中； 　　5、对每对离子的EP进行优化； 　　6、对每对离子的CXP进行优化； 　　7、保存MRM方法。 四、将MRM方法转化为LC-MS/MS方法 　　1、连接[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]后将现有的质谱体系deactivte激活LCMS，打开先前保存的MRM方法，右键显示方法左边导引条中第一行Acquire Method，点击Add/Remove Device Method添加泵、自动进样器等相关模块，选中方法左边导引条中第一行Acquire Method参数页，设置色谱同步（LC SYNC）。 　　2、设置色谱参数，分析时间一般为0.8-1.0min，流动相组成和流量与实际样品分析时相同；修改质谱分析时间（Duration,一般设置0.8-1.0min，）与色谱参数一致；设置GS1、GS2、TEM初始值为40、40、500左右，保存方法。 　　3、将化合物溶液稀释100-1000倍，在Tune模式下，双击Quantitative Optimization,选择FIA分析，根据向导进行自动优化。 　　4、将FIA自动优化后的最优的GS1、GS2、TEM值填入方法中。 五、色谱条件优化 　　接好色谱柱，关掉Tune，在Acquire栏下调出上一步优化好的方法，根据色谱柱规格和待分析体系的复杂程度设置[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]流动相比例及分析时间和质谱分析时间，或编辑洗脱梯度，保存方法。 参考资料：[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=112673]LC-MS/MS定量分析一般步骤-李立军[/url] API3200应该步骤也差不多，欢迎大家修正及补充…… [/quote] 新窦已经介绍的很详细啦，使用中由于习惯不同，可能稍微有些差异，但是基本步骤还是一样的。 1 在进样前，我们会先用50％的甲醇针泵进样一段时间，可以做Q1scan，等基线平稳后才换样品，这一步相当于洗针啦，顺便看看仪器信号是否稳定。 2 每次在优化参数后确定母子里或者子离子的m/z时，我们一般用走10MCA来确定。 3 一般优化参数时，我们也会用自动优化，即EDIT RAMP 某参数的方式，然后看[color=#DC143C]信号强度和峰形[/color]来最后确定该参数。

eugenec1 2008/10/16

楼上的已经给出了系统的,可靠的方法,谨补充一些细节. 一.3. Q1 扫描的范围从目标化合物质量的一半减去十,例如,要分析的化合物为287, 正离子为288, 一半是143.5, 减十, 133.5(133或134,135都行) 扫描至 287 X 2 + 10 = 574 观察有无 (M+2)/2, 以及 (2M + 1)/1 (DIMER) - 另外讨论如何解决此类问题. 同时可能会看到 M+23 (+Na), M+17 (+NH4) 等等. 然后如有必要,可以缩小扫描范围到 +/- 5 二. 此时亦可选择 Quantitative Optimization 中MS/MS (infusion) 由Analyst software 自动选出五个最大的碎片锋并自动优化 如果用手动" Product ion scan" 在"Product of"栏输入母离子(例如288.3),母离子的小数应为理论值,与上述Q1扫描的实际值相差不超过0.1(仪器最大误差).如果超过,可能是 Q1 CALIBRATION 要重做. Q3扫描范围应包含母离子 - 可以看到母离子随CE升高而下降 三.7. 此时可再回到手动注射泵进样，手动调节离子源电喷雾头的位置,上下左右都调一调,可以增加信号2-3倍, 对用到灵敏度极限的方法很管用