【分享】欧盟兽药检测方法（之二十二）

8 样品和取样程序
有关注意事项在ISO文件78/2-1982和6.3.1节中描述，下列注意事项源于2052/VI/84-EN的附录II。
8.1 样品性质：由奶和蛋样组成的品应能够进行残留检测，只有那些未被细菌腐败的样品方能检测。
8.2 样品量：样品量应满足按照参考方法进行实验的要求，并在需要时能重复分析。
8.3 样品在收集后应冷藏，并储存于—20℃以下以备分析。

9 测定步骤
9.1 样品解冻
9.2 原奶—样品离心脱脂（10min,2000g），随后冷冻（15min，—20℃）。10mL等分试样加入10mL盐溶液(6.2.1)和2mL 1%叠氮化钠溶液稀释（6.2.2）
9.3 肉—10g 均质的肉加30mL盐溶液（6.2.1）于均质器（7.5）中搅拌3min，离心后（200g）将上清液20mL分离出加入2mL 1%叠氮化钠溶液（6.2.2）
9.4 蛋—10g 均质的全蛋加入10mL 盐溶液（6.2.1）和3mL10%叠氮化钠溶液稀释（6.2.3）
9.5 透析—如9.2、9.3或9.4的等分稀释溶液注入透析装置中，4mL样品被恒流注入或双脉冲注射注入，在透析过程，接收液（水）连续不断地流过1mL注射器和稀释器，1mL分析液连续输入痕量富集柱中，整个分析液利用完后，富集柱将充满接收液溶剂，打开自动六孔阀，用HPLC流动相（6.2.5）反冲分析柱。
注：分析器给予体和接收体通道将充满水（6.1.8），六孔阀转回其原始位置，富集柱用 水再生。
9.5.1 透析模块配置
RIKILT使用脉冲透析模式，其有两个透析模块配有给予体容量2×370 L，接收体容量2×650 L，采用五个750 L脉冲和一个250 L 脉冲注入4mL样品，最后的脉动包含500mL已分析的第五个脉动注入和剩余250 L样品提取物。前五个样品静态分析3min。接收体流速为0.36mL/min。透析器效率约30%。最后的脉动注入在相同的接收体流速下分析9min，延长透析时间，最后2mL接收体溶剂从基质成分中流出，用于充满预柱。整个通过接收体积预柱的约8.6mL，操作完后，预柱用HPLC流动相（6.2.5）反冲5min。富集的分析物则从分析柱上分离出来。
9.6 空白样品和添加空白样品作为质量控制，并提供了标准曲线。添加样品，通过注射1-100 L水标准溶液（6.1.13.2）于原样品中。

10 结果计算
10.1 利用添加样品（9.6）结果得出校正曲线，并检查检测器响应线性关系。
10.2 与相同的盐溶液标准相比计算添加样品（5 g/kg）的平均回收率，结果见表1。
表1
药物 肉（牛肉、鸡） 蛋
LD 回收 LD 回收率
( g/kg) % CV% ( g/kg) % CV%
呋喃西林 2 76 1.7 1 85 4.1
呋喃旦啶 2 75 2.6 1 76 2.0
呋喃唑酮 2 89 2.2 1 88 4.8
呋喃它酮 5 86 4.0 3 86 6.5
10.3 用添加的样品所得的校正曲线分析计算样品中硝基呋喃的浓渡，并考虑稀释情况。
10.4 特异性：相应于蛋、奶和肉的空白样品的提取物色谱图未发现四种硝基呋喃物质保留时间的严重相互干扰。另外，通常用的抗菌剂和抑制球虫剂也不干扰。
10.5 检测限和测定低限
检测限（ g/kg） 测定低限（ g/kg）
蛋 肉 蛋 肉
呋喃西林 0.5 1.0 1 2
呋喃旦啶 0.5 1.0 1 2
呋喃唑酮 0.5 1.0 1 2
呋喃它酮 1.5 2.5 3 5
10.6 精密度：添加蛋、奶和肉样回收率的CV值见表1

11 特别事例

12 方法注意点
硝基呋喃在日光和白炽光下分解，所有的操作过程应暗处避光进行。
13 质量控制

14 检测报告

15 缩略语（略）
见手册12节附录I部分

16 检验流程图
奶、蛋、肉→盐溶液提取→透析→HPLC→计算结果