【讨论】以磷酸盐缓冲液做流动相应注意些什么问题呢?

盐的浓度不要太大。
水相与有机相要先混合一下看看有没有盐析出。
流动相用前要过滤。
实验结束要先用90％水把盐冲干净，再过渡到甲醇封柱子。

最后怎样才能知道盐被冲干净了呢?

首先，需要了解柱子的PH耐受限度，不要把PH值调得过高或者过低。
第二，缓冲盐的浓度一般在10-50mM比较适合，太低的话起不到作用，太高了对柱子不利。
第三，缓冲盐和甲醇/乙腈组成流动相时，不宜少于10%（v/v），太低的缓冲液比例会使缓冲盐析出。
第四，使用过缓冲盐的流动相后，柱子一定要及时清洗，而且不能马上用纯有机相如甲醇等，一定要先用带水相的溶液清洗，比如30%的甲醇冲洗20倍柱体积后换成纯甲醇。有条件的话，应该也把液相冲洗一下，否则很容易把单向阀之类的部分堵塞。
第五，中性缓冲液很容易长细菌，瓶子里面会长出毛毛的絮状物，十分恶心，所以缓冲盐配制后使用尽量不要超过3天。
先想到这么多啦，呵呵。

很好！受益匪浅~

基本上冲20个柱体积吧.一般30min左右基本就可以了.

当然不能用用质谱了。

一，需要了解柱子的PH适用范围，样品的PKa值，调节合适的PH值。
二，缓冲盐的浓度一般在10-50mM比较适合，
三，缓冲盐和甲醇/乙腈组成流动相时，注意合适的比例，防止盐的析出。
四，使用缓冲盐的流动相前，各通道排气跑时，缓冲盐通道和有机溶剂通道间应用水通道隔开，也是为了防止有盐析出堵塞通道
五，使用过缓冲盐的流动相后，不能马上用纯有机相如甲醇等，先用含水相的溶液一般用含90%水清洗，冲洗20倍柱体积后换成纯有机相。同时，应该脱开柱子把走过缓冲盐的通道冲洗一下，否则很容易污染该通道。
六，缓冲液很容易长细菌，缓冲盐配制后使用尽量不要超过3天。

用完仪器后要清洗系统，不然盐会析出，堵塞管路。

1.浓度不要过高
2.注意PH值得范围