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【转帖】放射免疫分析试剂！

平凡人

2008/12/22

1、标准品
　　标准品是放射免疫分析法定量的依据，由于以标准品的量用来表示被涮物质的量，故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外，还应具备稳定性，即在合理的贮存条件下保持原来的特性。
　　按实验要求，将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液，用于制作标准曲线。
2、标记物
　　标记抗原应具备：①比放射性高，以保证方法的灵敏度；②免疫活性好；③所用的核素的半衰期尽可能长，标记一次可较长时间使用，这对来之不易的抗原尤其重要；④标记简便、易防护。
　　要准确测量B与F的放射性，必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量，在使用125I时达5000～15000cpm。
3、抗体
　　应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体，用于放射免疫测定。
　　根据稀释曲线，选择适当的稀释度，一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。
4、B与F分离剂
　　以2%加膜活性炭溶液为例，2%加膜活性炭溶液的配制：
　　活性炭2g（杭州木材厂生产，森工牌732型）
　　右旋糖酐T200.2g
　　加0.1mol/L PB 至100ml
　　电磁搅拌1h，然后置于变通冰箱冰箱待用。
5、缓冲液
　　放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种，要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。
　　目前最常用的缓冲液有下列几种：①磷酸盐缓冲液；②醋酸盐缓冲液；③巴比妥缓冲液；④Tris –HCl缓冲液；⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。
　　在缓冲液中，除必须有弱酸及弱酸的盐成分外，还应根据不同检测项目加入下列物质：①保护蛋白：常用的有牛血清白蛋白或白明胶，浓度为0.1%～0.2%，用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂：多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂：如测定心钠素等肽类激素时，要加入适量的抑肽酶，用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解；又如测定cAMP、cGMP时，需加入EDTA·2Na，抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂：在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时，必须加阻断剂，使和蛋白质相结合的激素，变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白：采用二抗作B与F分离剂时，要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时，用PEG沉淀剂分离B、F，必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。
　　在神经肽的RIA时，常用PELH缓冲液，（按1000ml,pH7.6）：
　　0．1mol/l PB　　　　　　　　980.0ml
　　0.3mol/L EDTA·2Na　　　　　10.0ml
　　0.2%洗必泰溶液　　　　　　　10.0ml
　　溶菌酶　　　　　　　　　　　1.0g

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63780182

第1楼2008/12/22

谢谢分享，呵呵

0

平凡人

第2楼2008/12/23

63780182近期在论坛的活跃度下降了！
63780182 发表:谢谢分享，呵呵

0

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