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【原创】GPC标准品的选择

分析化学

  • GPC标准品的选择—Pullulan，Dextran和PS-OBG
    目前，高分子碳水化合物正被广泛应用于食品，啤酒，制药等行业，如香菇多糖，羧甲基纤维素，透明质酸，半乳甘露聚糖等，但对于不同分子量的碳水化合物来说，它们的作用都是不同的，因此在工业生产和科学研究中对于准确测定高分子碳水化合物的分子量就显的尤为重要。
    目前，绝大数公司，高校和科研院所都使用凝胶渗透色谱（GPC）法来测定高分子物质分子量，这种方法相对于光散射法来说具有操作简单，经济快速等优点，因此在各行业得到广泛的使用。对于这种方法来说，在测定待测样品时，需要选择标准品来做标准曲线，因此对于准确测定高分子碳水化合物的分子量来说，标准品的正确选择就显得尤为重要。
    Pullulan和Dextran是两种从微生物中提取的多糖，主要被用于分子量的测定，但是通过研究我们发现这两种多糖在水溶液中的构象为一个球状线团，他们的MH系数α为0.5左右，而上面我们提到的香菇多糖，羧甲基纤维素，透明质酸，半乳甘露聚糖等高分子物质在水溶液中的结构为扩展性构象，因此当我们用Pullulan和Dextran作为标准品来测定这些具有扩展性链结构的大分子物质分子量时，是不是可以准确测定它们的分子量呢？

    为了进行对比研究，我们选择了另一种分子量测定标准品燕麦β葡聚糖（PS-OBG，来源于百特纯大分子有限公司），该标准品时从燕麦细胞壁中提取的，结构单元为葡萄糖，与Pullulan和Dextran相同，但它是由β-1，4和β-1，3键连接而成的线性结构，在水溶液中呈现扩展性构象，MH系数α为0.71.
    实验材料：
    待测样品：
    香菇多糖（PLE），羧甲基纤维素(CMC)，半乳甘露聚糖(GG)
    葡聚糖标准品套盒：
    Shodex公司的pullulan-82（p-82），该套盒有8个点，分子量从5000到800000，
    百特纯大分子有限公司的通用分子量套盒（PS-OBG-GMw），该套盒有8个点，分子量从11000到89000
    实验方法：
    分别用GPC法和光散射(LLS)法来测定该样品的分子量
    试验结果：

    表：三种不同物质分子量的测定结果
    Samples    Mw1    Mw2    Mw3
    PLE    707k    1160k    790k
    GG    122k    331k    112k
    CMC    130k    354k    148k

    Mw1 : 用PS-OBG-GMw 套盒测定值
    Mw2： 用Pullulan-82 套盒测定值
    Mw3 : 用光散射测定值

    从表一中我们可以发现用pullulan-82来测定这些具有扩展性链结构的大分子物质时，会导致明显的过高测定，之所以会出现这样的情况，是因为对于同样分子量的标准品来说，球形线团结构在GPC柱子中流出时间要比扩展性结构的流出时间长，而用PS-OBG来测定的话，测定值则非常接近光散射值，因此在对于大多数植物及真菌类多糖和具有扩展性链结构的大分子物质来说，用PS-OBG来测定是非常适合的。
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  • ellery

    第2楼2009/05/01

    学习了！！光散射法是怎么做的？仪器要做少钱？

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  • 爱杰杰

    第3楼2009/05/01

    真是够负责的了，谢谢，大家一起学习

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  • 小不董

    第4楼2009/05/06

    应助达人

    光散射很贵的，原理是是一束光射过去，遇到高分子等大颗粒，发生折射，散射，监测到折射和散射的角度，根据这物质的大小来判断其分子量大小。

    ellery 发表:学习了！！光散射法是怎么做的？仪器要做少钱？

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  • ellery

    第5楼2009/05/15

    也需要分子量校正的标准品吗？

    doxw0323 发表:光散射很贵的，原理是是一束光射过去，遇到高分子等大颗粒，发生折射，散射，监测到折射和散射的角度，根据这物质的大小来判断其分子量大小。

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  • qqqq68

    第6楼2009/05/18

    那像对于聚甲醛这种线性的高分子来说，选择哪种标准品测量结果要准确些呢？

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  • lwlwb

    第7楼2009/05/19

    也需要，但是不需要标准曲线，单点标定就可以。

    ellery 发表:也需要分子量校正的标准品吗？

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  • tigertooth

    第8楼2009/05/19

    不完全对，原理上光散射是不需要标准品的，但一般的需要一个标准品做一下系统的适应性测试，也就是说目前仪器的状态和各参数都是好的，正确的。
    另，光散射就是光散射，跟折射没关系。

    lwlwb 发表:也需要，但是不需要标准曲线，单点标定就可以。

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  • gxu

    第9楼2010/04/12

    你能做光散射(LLS)法来测定分子量?能告诉我你的单位和联系方法吗?我的R-mai:dsliu@gxu.edu.cn
    dashengliu@126.com

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  • lanjing231

    第10楼2010/04/15

    你可以到北京理化测试中心永丰分部测试。咨询电话：010-58717615

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