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【求助】诚恳求助: 制作polyacrylamide gel (fused silica)capillary 过程中遇到的问题

chinatokorea

2009/03/27

毛细管电泳（CE）

赏
悬赏金额:50积分状态:已解决

本人最近制作polyacrylamide-gel capillary, 以其充当导体的作用, 即将已经填充好gel的capillary两端分别浸入buffer, 并apply the electric field across the capillary.

正如大家所知, 在电场的作用下, 离子可以在gel中移动, 而bulk solution则不能通过gel, 这样它就起到了导体的作用了.

本人采用的gel配方如下(化学聚合的方式):
acrylamide/bisacrylamide (1)10%T 5%C (2) 5%T 5%C 共配制了两种不同溶液
APS(ammonium persulfate)
TEMED (tetramethylethylenediamine)

可是在制作过程中遇到了难题, 让我摸不着头脑也很上火: 将degassed prepolymer 灌入capillary后, 无论等待多长时间(一天, 还是五天), 当我trim 毛细管两端之后, 刚刚露在外边的gel就像水挥发了似的, 很快就在两端出现了一小段空管区, 而根据我的实验要求, 这种情况是不允许的, 因为这样的话, capillary内的gel就会和capillary外的buffer围出一个bubble, 而这个bubble会在capillary通电过程中受外力作用移动, 最终破坏capillary内部的gel......

我也试过用商用的UV诱导gel灌capillary, 可是结果还是一样....头痛呀...

希望坛子里的兄弟姐妹们, 能帮忙解决这个问题.....不胜感激......

我想研究过capillary gel electrophoresis的同行们, 应该会知道如何解决这个问题吧......等待中.....

pgq198483 2009/04/01

已发送，请查收！

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pgq198483

第1楼2009/04/01

操作有问题，写下你的邮箱，我给你发本书！应该对你有帮助！

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chinatokorea

第2楼2009/04/01

非常感谢你的回复和帮忙...已经给你发站内消息了.....
pgq198483 发表:操作有问题，写下你的邮箱，我给你发本书！应该对你有帮助！

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pgq198483

第3楼2009/04/01

已发送，请查收！

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chinatokorea

第4楼2009/04/02

书已经收到...先谢谢了...正在研究...哈哈....

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chinatokorea

第5楼2009/04/05

看了一下...发现这本书跟以前看过的一本英文版毛细管电泳的内容相似...其中的方法也曾试过..不过效果不是很明显....

我等一段时间...如果没有其它人回复了..就把50分全部送给你....

再次感谢你的热心帮忙.....

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chinatokorea

第6楼2009/04/05

突然读到了一句...这在我之前看过的英文书箱中并未提到, 也许这个信息对专门搞毛细管凝胶电泳的人来说是不言而喻, 但对于我这个只是借助一下这个技术的人来说, 确实将其视为了"问题"

说话得有点绕, 一句话...我之前提到的可能是一个"不可避免"的问题....

书中原话"凝胶毛细管端口在空气中的暴露时间最好别超过10s, 否则口内凝胶容易干缩, 产生电流下降或无峰等现象. 万一出现这种现象, 需将端口切去若干毫米."

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