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【求助】提取回收率怎么会高呢?

  • xiaohualuck
    2009/04/24
  • 私聊

液质联用(LCMS)

  • 我先在正在摸一个固相萃取柱提取回收率的方法,怎么处理完了的样品比标准还要高一倍,方法具体如下:1ml甲醇活化小柱、1ml水冲洗、上样(5ul标准溶液+500ul空白血)、抽干后1ml水冲洗、抽干、1ml甲醇冲洗并收集流出液体、N2气吹干、100ul 10%甲醇复溶后离心,取上清液进样。对照是5ul样品直接加入10%甲醇100ul。
    我用的是液质连用,刚开始做,出这种问题觉得很奇怪,希望高手予以指导,谢谢!
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  • zhufangwei

    第1楼2009/04/24

    用空白基质加标比较一下,说不定对你的这个药有基质增强效应。

    xiaohualuck 发表:我先在正在摸一个固相萃取柱提取回收率的方法,怎么处理完了的样品比标准还要高一倍,方法具体如下:1ml甲醇活化小柱、1ml水冲洗、上样(5ul标准溶液+500ul空白血)、抽干后1ml水冲洗、抽干、1ml甲醇冲洗并收集流出液体、N2气吹干、100ul 10%甲醇复溶后离心,取上清液进样。对照是5ul样品直接加入10%甲醇100ul。
    我用的是液质连用,刚开始做,出这种问题觉得很奇怪,希望高手予以指导,谢谢!

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  • 雾非雾

    第2楼2009/04/24

    应助达人

    血做基底非常复杂,恐怕SPE柱不一定能净化得那么彻底的。要加强净化手段才行。

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  • 风之彩

    第3楼2009/04/25

    你做空白对照了没有?空白有没有干扰呢?
    还有做质谱的提取回收率,应该要考虑到基质效应。所以你的方法不太正确。
    你应该用空白血浆按你的样品处理那样过柱吹干后,加入含5uL标准溶液的100uL 10%的甲醇溶液来和你的样品比,这才是回收率。
    基质效应是空白血浆按你的样品处理那样过柱吹干后,加入含5uL标准溶液的100uL 10%的甲醇溶液振荡后和含5uL标准溶液的100uL 10%的甲醇溶液比。
    如果有基质增强效应,那么会出现你所说的情况的。

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  • xiaohualuck

    第4楼2009/04/26

    谢谢您的指导,我周一就按您说的方法试试。以前没做过质谱,刚开始,所以没考虑这么多,谢谢啦!

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  • zzz

    第5楼2009/05/20

    不知道楼主做了试验没有,期待你的结果,我们也好学习一下!

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  • xiaohualuck

    第6楼2009/05/21

    我按照那位老师的做法试过了,确实是基质增强效应。不过我还不知道如何去除这种效应,也不知道这会不会影响试验结果

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  • chuanfengh

    第7楼2009/05/21

    基质效应大就只能用工作曲线

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  • dickwang2008

    第8楼2009/05/21

    基质效应不可避免,但是使用固相萃取这种效应应该比较小。唯一的原因就是重新优化一下样品处理方法。

    xiaohualuck 发表:我按照那位老师的做法试过了,确实是基质增强效应。不过我还不知道如何去除这种效应,也不知道这会不会影响试验结果

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  • dickwang2008

    第9楼2009/05/21

    基质效应不可避免,但是采用固相萃取应该处理的比较干净。目前可行的办法就是重新优化一下前处理方法,再做下一步决定。

    xiaohualuck 发表:我按照那位老师的做法试过了,确实是基质增强效应。不过我还不知道如何去除这种效应,也不知道这会不会影响试验结果

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  • zhufangwei

    第10楼2009/05/28

    这种现象是普遍存在的就见怪不怪了,这就是液质离子源设计的弊端,很多我们是无法去解决的,先还是按照常规做你的方法吧,做到心中有数就行了。

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