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【求助】怎么优化生物碱的HPLC条件?

液质联用(LCMS)

  • 我现在做一个生物碱的LC-MS/MS的定量,质谱条件优化的挺好,可是色谱条件不怎么理想,出的TIC图峰宽太宽,有点拖尾。
    用的是10厘米的短柱,流动相是45%ACN和55%水(0.1%甲酸和10mM醋酸铵),流速0.3
    希望各位大虾帮帮忙,给点建议,这个HPLC条件怎么优化的好点,本人刚入行,很多都不是很清楚
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  • zhufangwei

    第1楼2009/05/17

    应该是有保留是吧,只是峰形不好??可以改变一下有机相的比例,适当的改变一下甲酸的比例,或者有机相用甲醇试一下,或者干脆不加甲酸都是应该去试一下的。

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  • tian1119

    第2楼2009/05/17

    有保留,峰形不好,有机相比例换过,甲酸不加也试过,改变的只是保留时间,而拖尾都没有改善

    zhufangwei 发表:应该是有保留是吧,只是峰形不好??可以改变一下有机相的比例,适当的改变一下甲酸的比例,或者有机相用甲醇试一下,或者干脆不加甲酸都是应该去试一下的。

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  • zhufangwei

    第3楼2009/05/17

    把乙腈换成甲醇试下,把甲酸的比例成0.5%或者其他试下,不过在摸索条件的过程中你一定要保证换用不同条件下色谱柱是平衡的。

    tian1119 发表:有保留,峰形不好,有机相比例换过,甲酸不加也试过,改变的只是保留时间,而拖尾都没有改善

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  • zhufangwei

    第4楼2009/05/17

    另外流速是不是太高了,换成0.2mL/min试下。

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  • tian1119

    第5楼2009/05/17

    你的意思好是0.5%的甲酸和10mM醋酸铵作为流动相?
    在0.3流速下峰宽就宽,换成0.2的话不会更宽吗?

    zhufangwei 发表:把乙腈换成甲醇试下,把甲酸的比例成0.5%或者其他试下,不过在摸索条件的过程中你一定要保证换用不同条件下色谱柱是平衡的。

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  • 风之彩

    第6楼2009/05/17

    生物碱是碱性化合物,所有流动相呈碱性利于色谱分析,但是用质谱检测时,生物碱又通常用正离子检测,所以流动相呈碱性又不利于质谱分析,这两者是一对矛盾。你应该综合考虑这两方面的因素来优化你的流动相条件。
    还有你的溶剂是什么,样品是否是流动相溶解的呢?

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  • tian1119

    第7楼2009/05/17

    楼上大哥说得很对,我看的文献中很多都是把流动相调成酸性的,明天我去试试把甲酸量加大,但是就怕拖尾更严重了
    样品是用低于流动相的有机比例溶解的

    juju11 发表:生物碱是碱性化合物,所有流动相呈碱性利于色谱分析,但是用质谱检测时,生物碱又通常用正离子检测,所以流动相呈碱性又不利于质谱分析,这两者是一对矛盾。你应该综合考虑这两方面的因素来优化你的流动相条件。
    还有你的溶剂是什么,样品是否是流动相溶解的呢?

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  • elevern

    第8楼2009/05/18

    小柱子走梯度太难平衡了
    换C8的柱子,要么换苯基柱,把有机相比例调上去

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  • zhufangwei

    第9楼2009/06/27

    用初始流动相比例溶液啊,现在进展怎么样了

    tian1119 发表:楼上大哥说得很对,我看的文献中很多都是把流动相调成酸性的,明天我去试试把甲酸量加大,但是就怕拖尾更严重了
    样品是用低于流动相的有机比例溶解的

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  • 子不曰

    第10楼2012/02/12

    能不能给我发一篇 关于 生物碱 或是氨基类化合物的液相分析文献,我的也是拖尾和分离效果不好,451768967@qq.com 谢谢

    (tian1119) 发表:楼上大哥说得很对,我看的文献中很多都是把流动相调成酸性的,明天我去试试把甲酸量加大,但是就怕拖尾更严重了
    样品是用低于流动相的有机比例溶解的

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