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【求助】能不能用带有缓冲盐的水相冲洗柱子中的残留

液质联用(LCMS)

  • 现在有一个疑问想请教老师们,仪器LC-MS,分别是安捷伦1100,AB 3200,LC-MS。
    做的是药代动力学,因为样品前期处理是用的简单的乙腈沉淀蛋白后进样,洗脱梯度是乙腈:1mM甲酸铵(60:40),现在走完一条标曲(8个点)、一套指控(4个点)之后,走一个人的样品(13个点),再走质控合格。
    继续再走一个人的样品后,质控就无法合格了。只能用水比例较大的流动相冲洗半小时到一小时,之后质控就能合格了。我想问在用水比例较大的流动相冲洗时,能不能直接用带有缓冲盐的水相,也就是用乙腈:1mM甲酸铵(10:90)冲洗,这样可以节省很多的平衡时间。
    我还没有试,望高手指点
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  • 论坛版主招募|新窦

    第1楼2009/07/07

    如果不是为了冲洗后保存柱子,而单纯只是想减小柱子内的基质残留(你说的“再走一个人的样品后,质控就无法合格”应该是样品基质残留),用缓冲盐的水相冲是可以的。不过这个也要看你冲过后是否达到你预期的效果,如果单纯用缓冲盐的水相冲后你的质控能合格就没问题。
    我觉得走完一个人的样品后多用流动相(乙腈:1mM甲酸铵60:40)再多平衡20-30min应该同样也能达到预期的效果。

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  • 风之彩

    第2楼2009/07/07

    你说的质控不合格是什么原因引起的?是不是像楼上说的样品基质残留引起的?
    如果是,那么只能说明你的方法不合适,前处理方法有待改进,因为你的方法不适合大批量进样。
    如果你只是自己做做课题,看看实验结果,又不想改方法,还不怕麻烦,那么你就进一点,冲一会柱子;如果你的方法是新的,还可能发个方法学的文章什么的,那最好还是改进一下,这部分内容可以加入讨论;如果你的数据要用来报批,那么最好还是不要这么做,指导原则里面对于一个分析批的定义,好像还没有说中间可以冲会柱子什么的。

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  • karsyer

    第3楼2009/07/08

    增加了5分钟的平衡的时间,但是结果质控也不能合格。
    我们估计可能是基质残留引起的,但是因为已经做了很多样品,是做的项目,时间上来不及了。

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  • karsyer

    第4楼2009/07/08

    怎么能确定就是基质残留引起的?我们估计是这样,所以希望能改变一些流动相的冲洗条件,使能达到大批量测定的效果。现在时在做I期临床的课题,时间上也有限制,已经做了不少人的了,来不及改动制备方法。
    如果不能作为一个分析批,那怎么办啊,难道每一个人的药代曲线都需要重新做一个标曲么……

    juju11 发表:你说的质控不合格是什么原因引起的?是不是像楼上说的样品基质残留引起的?
    如果是,那么只能说明你的方法不合适,前处理方法有待改进,因为你的方法不适合大批量进样。
    如果你只是自己做做课题,看看实验结果,又不想改方法,还不怕麻烦,那么你就进一点,冲一会柱子;如果你的方法是新的,还可能发个方法学的文章什么的,那最好还是改进一下,这部分内容可以加入讨论;如果你的数据要用来报批,那么最好还是不要这么做,指导原则里面对于一个分析批的定义,好像还没有说中间可以冲会柱子什么的。

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  • 贝壳里的海

    第5楼2009/07/08

    建议你在梯度洗脱设置里,在原来的进样方法时间之后加一个“梯度”,这个“梯度”时间段内,把流速调高,这样可以缩短时间。你的方式加大缓冲盐水相比例,可以尝试,但是你冲洗完,还得用60:40的比例平衡柱子,平衡时间不知道要多长时间,如果很长,那这样折腾没有意义,如果很短时间就可以平衡好,那就可以把流速调高和增大缓冲盐水相相结合,创造一个更理想的效果。

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  • 雾非雾

    第6楼2009/07/08

    应助达人

    个人认为肯定行的,这个比例我们LCMS也用过,不过是乙酸铵。甲酸铵一定要买特纯的,我们以前买的纯度不够,就经常会堵CDL,后来买sigma的高纯的就不堵了。

    karsyer 发表:我想问在用水比例较大的流动相冲洗时,能不能直接用带有缓冲盐的水相,也就是用乙腈:1mM甲酸铵(10:90)冲洗,这样可以节省很多的平衡时间。

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  • 风之彩

    第7楼2009/07/09

    不知道你的方法学是怎么做的?当时没有发现这样的情况?
    像你这样的情况比较麻烦了,质控样品不合格,超过一定的比例,你整个分析批的样品都作废了,你也不能随便改你的方法,不然和方法学对不上,还是不行的,就算改,也要别人看不出来才行。你中间加入平衡时间,到时候如果专家较真,就会问为什么连续的两针进样时间间隔会不对?
    不行还是宁愿多冲柱子,多进标曲吧,一个分析批不要进太多的样品了。

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  • elevern

    第8楼2009/07/09

    加梯度洗脱,把蛋白冲冲干净
    你才做了一个人的,质控就不行了。我觉得你的方法学有问题
    找这样子的话,你先期的批内批间精密度估计也有问题

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  • zhufangwei

    第9楼2009/07/09

    我觉得是你样品没有处理干净造成的,好好在考察下前处理过程吧,不是冲不冲柱子的问题。

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