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【讨论】液相色谱问题大讨论之一——液相色谱进样量与峰形的问题?

  • 淮河木头
    2009/07/09
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 我们用的是安捷伦1100的高效液相色谱仪,在做一个软膏剂的时候,标准规定的浓度进样10μl,峰形有前延峰,把浓度稀释一半,进样10μl,峰的对称性在1.0左右,如果再把浓度稀释一半,进样20μl的话,峰形又不对称了。

    大家分析一下是什么原因?

    液相色谱的进样量与峰形之间的关系怎样?

    (药品名字是“复方地塞米松乳膏”,内标法测定地塞米松含量,内标物是甲睾酮)
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  • hujijimn

    第1楼2009/07/09

    1. 进10ul不对称后稀释一半进10uL对称;—— 应该是柱子过载;

    2. 后又稀释一倍进20uL,不对称 ——样品体积大,使得样品不能浓缩于柱头,不便于分离导致,可以更换稀释剂,例如说减少乙腈/甲醇的量,增加水的量试一试。

    goog001 发表:我们用的是安捷伦1100的高效液相色谱仪,在做一个软膏剂的时候,标准规定的浓度进样10μl,峰形有前延峰,把浓度稀释一半,进样10μl,峰的对称性在1.0左右,如果再把浓度稀释一半,进样20μl的话,峰形又不对称了。

    大家分析一下是什么原因?

    液相色谱的进样量与峰形之间的关系怎样?

    (药品名字是“复方地塞米松乳膏”,内标法测定地塞米松含量,内标物是甲睾酮)

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  • 淮河木头

    第2楼2009/07/09

    谢谢指教!

    还有一个问题请教大家,标准规定的色谱条件,但是在实际试验过程中,峰形、理论板数等参数并不好。问那些参数是允许变动的?(如流动相、进样量、流速、柱温等)

    hujijimn 发表:1. 进10ul不对称后稀释一半进10uL对称;—— 应该是柱子过载;

    2. 后又稀释一倍进20uL,不对称 ——样品体积大,使得样品不能浓缩于柱头,不便于分离导致,可以更换稀释剂,例如说减少乙腈/甲醇的量,增加水的量试一试。

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  • 知足常乐!

    第3楼2009/07/09

    可以改变流动相和柱温来改善峰型

    goog001 发表:谢谢指教!

    还有一个问题请教大家,标准规定的色谱条件,但是在实际试验过程中,峰形、理论板数等参数并不好。问那些参数是允许变动的?(如流动相、进样量、流速、柱温等)

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  • zhenhua1229

    第4楼2009/07/09

    楼上的这个问题在药典附录里都有:正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组成、检测器类型不得任意改变外,其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组成的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等,均可适当改变,以适应具体的色谱系统并达到系统适用性试验的要求。但对某些品种,必须用特定牌号的填充剂方能满足分离要求,可在该品种项下注明。
    在欧洲药典HPLC附录里也有类似规定:EP6 2.2.46 chromatographic separation techniques里的Liquid chromatography。有详细说明。


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