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【求助】请各位高手帮我看看我做标准曲线时的问题

液相色谱(LC)

  • 我在做多效唑的标准曲线时,用的是安捷伦1100手动进样液相,柱子是安捷伦C-18反相色谱柱,检测器是紫外。进同一个浓度的多效唑样品两针,出峰后,前一针和后一针的多效唑的峰的峰面积相差很大(如前一针是两万多二后一针是一万多)。我用的色谱条件是国标上的(跟一些文献上说的不一样)。规定进样是10ul,定量环是20ul,我进样的是五倍体积100ul,我的保留时间是19min左右,大概等到基线跑到25min时,我就重新进新的样品。就这样我一直做不出标准曲线来,急啊,各位高手帮我看看我的操作到底是那出了问题?谢谢!!!(附注,柱子和液相是经常使用的,估计没问题)
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  • guava

    第1楼2009/09/23

    你的样品是用什么溶剂溶解的?如是混合溶剂,手动进样之前应振摇样品,使样品混合均匀。

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  • zhhp508

    第2楼2009/09/24

    峰形和基线都正常吗?如果都正常的话,那很有可能你进样的样品有问题哦。

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  • 儒雅凤

    第3楼2009/09/24

    一般来说,采用国标是没错的。我也做过多效唑,感觉做标样是稳定的,重现性也好,做样品的时候,要考虑样品的物理性能,选择适当的溶剂。

    050241310 发表:我在做多效唑的标准曲线时,用的是安捷伦1100手动进样液相,柱子是安捷伦C-18反相色谱柱,检测器是紫外。进同一个浓度的多效唑样品两针,出峰后,前一针和后一针的多效唑的峰的峰面积相差很大(如前一针是两万多二后一针是一万多)。我用的色谱条件是国标上的(跟一些文献上说的不一样)。规定进样是10ul,定量环是20ul,我进样的是五倍体积100ul,我的保留时间是19min左右,大概等到基线跑到25min时,我就重新进新的样品。就这样我一直做不出标准曲线来,急啊,各位高手帮我看看我的操作到底是那出了问题?谢谢!!!(附注,柱子和液相是经常使用的,估计没问题)

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  • czc8670

    第5楼2009/09/24

    峰形和基线都正常吗?如果都正常的话,那很有可能你进样的方法有问题哦。进样针在进样品时不要急于将进样针拿下要多放在手动进样阀上。

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  • 有水有渝

    第6楼2009/09/24

    应助达人

    标准溶液是否稳定,均一?冲洗一下定量环。

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  • duming

    第7楼2009/09/24

    我以前用自动进样器做过一个样品,每瓶样品进三针,每针200ul,进了两瓶
    得到峰面积是1、低2、高3、更高4、低5高6更高。
    觉得两瓶很有过滤峰面积都是由低到高。后来每进一针前都把样品摇匀,就好了

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  • 往往外

    第8楼2009/09/24

    应助达人

    仪器运行是否正常?压力是否正常?管路系统是否正常?
    图谱是否正常?
    没做过这类物质不知流动相是什么?

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  • 050241310

    第9楼2009/09/27

    谢谢各位的建议,我按这个做着试试。另外补充上面的问题:多效唑样品溶剂是甲醇,流动相是甲醇:乙腈:水( 35 : 20 : 45),多效唑是在低温冰箱中保存,并且多效唑一般是很稳定的常温下是不会分解的。基线和峰形还可以,像甲醇的溶剂峰是在规定的时间内出现的(3--5min)

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