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【求助】求助:标准曲线如何制作?

液相色谱(LC)

  • 要检测样本内五肽(氨基酸序列已知,如GRGDS)的浓度,我看文献上是用6mol/L(也有用12mol/L)盐酸水解后,将五肽水解成单个的氨基酸,再用柱前衍生化法用HPLC检测各氨基酸的浓度。我现在的疑问是:1 标准曲线如何制作?是选择相应的氨基酸,各氨基酸使用相同的摩尔浓度测定再描绘的吗?

    2 样本中的多肽浓度的结果如何给出,是用检测得到的单个氨基酸浓度吗?理论上五肽中各个氨基酸的摩尔浓度除了甘氨酸(GRGDS中两个G)外,应该都是相同的吧?
    本人非药物分析专业,对HPLC一知半解,还请各位高手解惑,多谢!
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  • 有水有渝

    第1楼2009/12/14

    应助达人

    一定要水解后才能衍生吗?
    1、标准曲线用相同的已知含量的氨基酸配制系列不同的浓度制成,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标建立曲线方程。
    2、把样品的峰面积代入曲线方程得出浓度。

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  • yfdihdx

    第2楼2009/12/14

    我的样本中有固态物质,需要用有机溶剂把它溶解。至于水解多肽,是参考文献中的做法。如果不水解短肽,不知道有机溶剂(如氯仿),会不会影响短肽的定量测定呢?
    还有,如果直接用短肽做标准曲线,可以吗?

    顺便再问个问题,衍生用的异硫氰酸苯酯(PITC)用哪个厂家的比较好?sigma的1ml200多,还要预订,要等一个月的时间

    xky0230699(xky0230699) 发表:一定要水解后才能衍生吗?
    1、标准曲线用相同的已知含量的氨基酸配制系列不同的浓度制成,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标建立曲线方程。
    2、把样品的峰面积代入曲线方程得出浓度。

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  • 有水有渝

    第3楼2009/12/15

    应助达人

    只要短肽与五肽之间有确定的定量关系能够换算就行,异硫氰酸苯酯(PITC)这个东西以有用过,忘了是什么品牌的了,你看一下国内的比较大 的试剂公司的就行,主要是要求纯度高点。

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  • yfdihdx

    第4楼2009/12/15

    感谢朋友回复。
    我贴子里说的短肽,就是五肽。

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