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【资料】Agilent 1100方法和序列设置中的小技巧

液相色谱（LC）

  • 比如我做肌苷氯化钠注射液的有关物质，可以在前缀上设jglhn，后面自动生成000，做液相色谱断断续续有8年的历史了，自从买了Agilent 1100，感觉做实验方便得多。无需手动进样，摸好条件后只要设好方法和序列，一点击start，仪器就开始工作了。不只是做样品，还可以包括最后的冲柱子，它都能一次性完成。但是方法或序列设置不当的话，会导致做无用功，全部白做都有可能。下面我来谈谈自己的工作经验和技巧。

    　　1. 摸条件 (以C18柱为例)

    　　可以选单针进样模式，将sample info设置好文件名，第一针一定要走足够长的时间，我是做化学药的，通常走到主峰保留时间的2倍，看看后面是否有杂质峰出现，要保证针与针之间的数据平行必须做到一针出峰干净后再走第二针。在method里设置必要的参数，比如进样量(20μl)、流动相配比(D泵 0.5%的冰醋酸水溶液)、流速(1.0ml/min)、柱温(35℃)、检测波长(248nm)、保留时间(45min)等，将摸索好的方法用save as method保存到jg1.m。需要说明一点，走单针时文件名自动累加，第一针是000，第二针就自动生成001。

    　　2. 设置序列参数

    　　选择序列进样模式，在sequence parameters中设置好第一针的文件名，还是以肌苷氯化钠注射液为例，在前缀上设jglhn，后面自动生成000，把它改为100与单针区别开，免得覆盖!在sequence table中有几个参数是必须设置的，如方法名和进样次数。而瓶号和样品名称是可以不设置的，也就是说可以让仪器只运行方法而不进样，主要用来冲洗或平衡柱子。一个序列中可以包括多种方法，比如做有关物质自身对照法时，低浓度的样品保留时间可以设得短些，假如21分钟出主峰，我就设到24分钟，方法另存为 jg2.m。

    　　假如我做两个批号的样品，进样和冲洗的设置如下：

    　　瓶号 样品名 方法 进样次数

    　　1 ref1 jg2 3

    　　2 sample1 jg1 3

    　　3 ref2 jg2 3

    　　4 sample2 jg1 3

    　　wash1 1

    　　wash2 1

    　　我们可以看到序列中一共包含14个文件，它们的文件名是jglhn100——113。最后两个文件是不需要出报告的，wash1和wash2代表冲洗柱子程序，比如wash1用A泵(水)冲洗，wash2用A泵(水)-B泵(甲醇)(30：70)冲洗。这样一来，人可以离开，仪器会自动完成全过程。需要注意的是：确保充足的流动相!此外，在sequence information中设置关机程序，选择shut off，standby状态即可。需要说明的是，如果中途停止，按stop，再按 start时文件名被覆盖。如果你需要保留原来的文件，可以重新设置第一个文件的编号，比如200。

    　　3. 巧用partial sequence来补针

    　　假如发现有一针结果不理想，需要补进一针或数针，又不想改变原有的序列，就可以用sequence中的partial sequence→run sequence来进行补针。在想要补的文件前面的小方框中打勾，然后运行部分序列即可。

    　　4. 实验中出现机械手突然失灵，进样针指示灯变红怎么办?

    　　有时侯时间做长了，机械手会失灵，停止工作，指示灯变红。我最近就碰到过这个现象，解决办法：先将样品室的开关关掉，数分钟后重新开启，并且将样品瓶转移到机械手相对容易抓到的位置，重新设置一下瓶位号。比如19、20号就是比较难抓的位置，需要往里转很大的角度，21、22就相对容易些。

    　　这些是我从实践中摸索到的一点体会和窍门，也许比较简单一些，希望得到大家的补充。

    　　再补充一点：

    　　不要忘了设置装流动相的体积，如果中途添加了流动相，一定要即时更新。虽然是个小的细节问题，忽略的话会带来大麻烦的!

    　　比如如果实际体积是1000ml,你忘了设置，上回剩余的只有200ml,走一段时间后仪器就自动停止了。而如果情况相反也不行，实际只有200ml,你设了1000ml,会导致空气进入色谱柱，严重时无法恢复。当然这后一种情况很少会遇到，只是提个醒。
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  • 该帖子已被版主-柏坡加5积分，加2经验;加分理由:感谢楼主经验分享
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  • lanbing08

    第1楼2010/02/04

    谢谢，英文版用起来很吃力的..

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  • 柏坡

    第2楼2010/02/04

    英文版的BUG少，看惯了就好。

    lanbing08(longshwngsc) 发表:谢谢，英文版用起来很吃力的..

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  • blue0324

    第3楼2010/07/16

    多谢了，觉得挺有用的！

0
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  • 小不董

    第4楼2010/07/16

    应助达人

    经验之谈。很多时候细节很重要。

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  • m3139609

    第5楼2016/09/04

    请问一下，我先保存一个进样后洗柱子的方法，要怎么设置，谢谢

    小不董(doxw0323)发表:经验之谈。很多时候细节很重要。

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