vanvan
第2楼2009/12/23
BAIDU到的,还是不懂啊,懂的来说说。
搞不对称的朋友都会知道Ee值的高低决定文章档次的高低,在一两年HPLCEe值的测试中曾经遇到一些问题,在此就作为一些个人经验之谈吧!
大家都知道测定一个化合物的Ee值往往都需要有消旋体作为对照,根据消旋体的保留时间确定手性化合物的保留时间,根据峰面积的大小来确定Ee值。
但是我在测试的时候发现,化合物的浓度和所选紫外检测波长对Ee值也有一定影响。
1。在测定Ee值时,一般选择该化合物的最大紫外吸收波长为最佳,这时的峰形最美观,基线最平,反之,基线不平,杂质峰明显偏大。Ee值可能相差达到5个百分点。
2。浓度对Ee的测定有着很大的影响,有时相差能有50个百分点,感觉比较离谱,但是事实就是这样。曾经做过端基炔对醛的加成,当时测定Ee值浓度配的比较大,吸光度已经达到3.0左右,保留时间与消旋体一致,但是测出Ee值只为30%左右,后来将浓度降低,吸光度为1.5左右,此时测出的Ee值为82%,通过比较发现,浓度大的那个紫外吸收与浓度小的完全不一样。得出结论就是光靠消旋体保留时间来确定Ee有很大的弊端,这样是很不准的,所以Ee测定一定要通过保留时间和紫外吸收两者共同作为判定依据,一个都不能少。从紫外吸收谱图中我们发现,浓度大的那个峰形明显有很多的小峰,也就是说它的最大吸收不是一个波长而是有很多波长,我个人认为浓度过大会使得峰堆积,从而使得峰形变窄,峰面积变小,而使得Ee值变化是有可能的。如果只通过消旋体保留时间来确定Ee值,而不需要紫外检测,Ee完全可以造假。
以上只代表我个人观点,不代表权威,是我本人在测定中遇到的现象,由此引起学术造假本人不负任何责任。本人使用的是waters1525型HPLC,紫外检测为1996型。