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【求助】流动相中离子对试剂与缓冲溶液比例问题

  • huaibeijiayuan
    2010/01/09
  • 私聊

厂商论坛

  • 请问zxhcnf版主,在HPLC的方法开发中,针对流动相中缓冲盐和离子对试剂的比例如何确定,也就是说假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相,这二者是按1:1比例的混合吗?或者说这方面有什么规则?欢迎各位版友参加讨论。
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  • 小卢

    第1楼2010/01/09

    不是很清楚。
    是不是应该是通过实验来看是否比例适当呢?

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  • huangyan1314

    第2楼2010/01/09

    不是太确定。但如果磷酸二氢钠是用来调节PH值的,那应根据你所需的PH来选择适当的比例吧!

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  • zxhcnf

    第3楼2010/01/10

    液相方法开发过程中,在流动相中加入缓冲盐主要有两个方面的考虑,1)利用其缓冲能力用于调节流动相的pH,使流动相的pH值在某一指定值的附近;2)增强流动相的离子强度,减少或削弱被分析化合物与固定相中硅羟基的相互作用,改善峰行;
    在流动相中加入离子对试剂时最主要的一个目的就是,利用离子对试剂的两面性,既能在C18填料上有较好的保留,又能与强极性的被分析产生电性作用,增强化合物的保留能力;但是离子对试剂加入后化合物保留时间的变化对pH非常敏感,而离子对试剂本身并不能起一个有效的pH缓冲或稳定作用。为了使离子对试剂加入后保留时间相对稳定,因此需要在加入离子对试剂的同时也加入缓冲盐在流动相中来调节pH。
    由于缓冲盐和离子对试剂易溶于水难溶于有机溶剂,因此缓冲盐和离子对试剂通常是先在同一容器中配成二者的混合水溶液,调节好pH后再使用,通常缓冲盐的浓度范围大约10~100mol/L,最常用的是20、30、50mmol/L,而离子对试剂10mmol/L通常是用得比较多的一个浓度。LZ所说的“假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相”,其配置方法我认为是,先准确称量好50mmol的磷酸二氢钠和10mmol四丁基溴化铵,然后二者一起加入到一个1000ml的容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度。

    huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:请问zxhcnf版主,在HPLC的方法开发中,针对流动相中缓冲盐和离子对试剂的比例如何确定,也就是说假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相,这二者是按1:1比例的混合吗?或者说这方面有什么规则?欢迎各位版友参加讨论。

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  • huaibeijiayuan

    第4楼2010/01/11

    谢谢zxhcnf的热心解答,赶快记录下来

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  • pheui

    第5楼2010/01/11

    lz说的是这两种溶液的配置问题?还是说先分别将这两种溶液配好,再按什么比例混合?

    huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:请问zxhcnf版主,在HPLC的方法开发中,针对流动相中缓冲盐和离子对试剂的比例如何确定,也就是说假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相,这二者是按1:1比例的混合吗?或者说这方面有什么规则?欢迎各位版友参加讨论。

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  • huaibeijiayuan

    第6楼2010/01/11

    因为以前没有操作过,不知如何实施,zxhcnf已经解释得比较详细了

    pheui(pheui) 发表:lz说的是这两种溶液的配置问题?还是说先分别将这两种溶液配好,再按什么比例混合?

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  • 小卢

    第7楼2010/01/11

    看了才明白怎么回事,很详细啊!
    原来淮北问的是一个配制的顺序,我还以为是配制比例的研究呢!

    zxhcnf(zxhcnf) 发表:液相方法开发过程中,在流动相中加入缓冲盐主要有两个方面的考虑,1)利用其缓冲能力用于调节流动相的pH,使流动相的pH值在某一指定值的附近;2)增强流动相的离子强度,减少或削弱被分析化合物与固定相中硅羟基的相互作用,改善峰行;
    在流动相中加入离子对试剂时最主要的一个目的就是,利用离子对试剂的两面性,既能在C18填料上有较好的保留,又能与强极性的被分析产生电性作用,增强化合物的保留能力;但是离子对试剂加入后化合物保留时间的变化对pH非常敏感,而离子对试剂本身并不能起一个有效的pH缓冲或稳定作用。为了使离子对试剂加入后保留时间相对稳定,因此需要在加入离子对试剂的同时也加入缓冲盐在流动相中来调节pH。
    由于缓冲盐和离子对试剂易溶于水难溶于有机溶剂,因此缓冲盐和离子对试剂通常是先在同一容器中配成二者的混合水溶液,调节好pH后再使用,通常缓冲盐的浓度范围大约10~100mol/L,最常用的是20、20、50mmol/L,而离子对试剂10mmol/L通常是用得比较多的一个浓度。LZ所说的“假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相”,其配置方法我认为是,先准确称量好50mmol的磷酸二氢钠和10mmol四丁基溴化铵,然后二者一起加入到一个1000ml的容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度。

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  • 土老冒豆豆

    第8楼2010/01/11

    应助达人

    北北,先各自配制好,再两两混合。

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  • huaibeijiayuan

    第10楼2010/01/11

    就是想知道二者的配比比例啊

    土老冒豆豆(土老冒豆豆) 发表:北北,先各自配制好,再两两混合。

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  • 小卢

    第11楼2010/01/12

    不是顺序吗?
    那就要慢慢试试啦,不过配比中是否是有大量泡沫出现啊?

    huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:就是想知道二者的配比比例啊

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