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【第二届网络原创参赛作品】我的一次分析方法建立全过程

☜譕♥魚☞

2010/01/19

液相色谱（LC）

胺化物分析条件的确定

1、流动相的选择
a、流动相A：1.74g/L无水K2HPO4（H3PO4调pH7.0）；流动相B：甲醇-乙腈（1：1）。
b、流动相A：Buffer：Solvent（30：70）；流动相B：Buffer：Solvent（5：95）（buffer：取2.0ml三乙胺于950ml水中，用冰乙酸- 水（5：95）调pH7.5用水稀释至1L，Solvent：乙腈-甲醇（4：6））
在实际检测中发现用a方法时，二萘甲基甲胺未被检出，改动a中流动相B的甲醇与乙腈的比例，改动流动相A为N2HPO4溶液，但是结果还是二萘甲基甲胺不会出峰（也有可能出峰时间太长，判定不予采用）。用b方法时，则能清晰的显示出各个杂质，但是在分离度上遇到了问题，我对b中流动相A的比例进行了调整。在流动相A的确立共进行了3次比例的调整。（1）Buffer：Solvent（30：70）；（2）Buffer：Solvent（40： 60）；（3）Buffer：Solvent（50：50）最终发现（2）就能达到良好的分离效果。Buffer：Solvent（40： 60）。最终采确定b方法，流动相A：Buffer：Solvent（40：60）；流动相B：Buffer：Solvent（5：95），buffer：取2.0ml三乙胺于950ml水中，用冰乙酸-水（5：95）调pH7.5用水稀释至1L，Solvent：乙腈-甲醇（4：6）。

2、在柱子的选择上都采用了WATERS的柱子。（1）Ineresil ODS-2 3.0*150mm 5u；（2）Ineresil ODS-3V 4.6*250 5u。但是在用（2）时发现出现右旋体，与我们所要分析的杂质无关，且不能达到良好的分离效果。采用：（1）Ineresil ODS-2 3.0*150mm
5um。
3、溶液pH的的调整。我试过调pH6.5，7.0，7.5，结果没有任何影响，考虑胺化物碱是碱性的，于是采用pH7.5。
4、在柱温和流速上进行了微调，影响不大，最终确定最适宜的柱温和流速分别为：40℃和0.8ml/min。
5、为了缩短分析时间，达到更好的分离效果，我们又对梯度洗脱的方式进行了优化，通过图谱的对比和实际检验，最终确定了按以下方式梯度洗脱：

时间T（min）流动相B(%)
0 100
8 100
25 0
30 0
30.1 100
35 100

6、最后，在检验过程中发现，溶剂对供试品溶液的稳定又影响，于是我们试了以下几中溶剂：a，ACN-WATER(1:1);b，MEOH;c，ACN .最后发现用ACN做溶剂各杂质及主成分稳定。采用ACN做溶剂.

精
该帖子已被管理者-有水有渝设置为精华，下面是奖励记录：加15积分,加5声望

分
该帖子已被版主-独钓寒江雪加15积分，加2经验;加分理由:参赛作品

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有水有渝

第1楼2010/01/19

应助达人

楼主提供仪器型号，色谱图对比，提供柱效，分离度等加以完善一下？

0

☜譕♥魚☞

第2楼2010/01/19

好的，明天去考点图。再传！

0

柏坡

第3楼2010/01/19

楼主能添一下摸索的心得就好了，您是出于什么考虑的？

0

土老冒豆豆

第4楼2010/01/19

应助达人

是啊，至少、最少，提供下不同流动相条件下得到的色谱图给大家看下也好啊。

0

vanvan

第5楼2010/01/20

实验过程描述的很详细啊。加谱图佐证一下，大家看得更直观。

0

happy王子矜

第6楼2010/01/20

不太详细，我还以为是验证方法呢，原来是开发方法。

0

onlyonejerry

第7楼2010/01/20

支持下，要是有图就更直观了！

0

michale1978

第8楼2010/01/20

很专业，值得学习，谢谢!

0

东风恶

第9楼2010/01/20

好像不是很全面的啊！方法的建立是有几个指标的。
您这个可以说是初探。

0

choy

第10楼2010/01/20

看起来简单，做起来难

0

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