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【求助】梯度洗脱的做法

  • violet0569
    2010/01/28
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 最近做氨基酸的分析,要用到梯度洗脱,请各位高手指点一下。

    我知道一般梯度洗脱都应该用初始条件平衡色谱柱,然后再运行两个空白梯度。可是文献上大部分氨基酸分析的初始条件都是用纯缓冲液冲0.5-1min,然后再逐渐升高有机相的比例。我用的是C-18柱,如果用纯缓冲液平衡色谱柱,会不会对柱子有影响?不是说用纯水冲容易使柱子的烃基毛倒伏,并缩短柱子寿命吗?

    另外,我用的是岛津的液相,流动相体系是:A 缓冲盐 B 60%的乙腈。岛津的液相使用纯乙腈体系容易使单向阀中的宝石求粘连,这样的话我能不能使用贾春来封柱子,使用时再用乙腈体系平衡?由于流动相是乙腈体系,我不知道用甲醇封柱子会对实验重现性方面产生影响吗?

    谢谢啦!!!
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  • muziying114

    第1楼2010/01/28

    能不能用纯水主要看柱的特性,Waters的反相柱就可用100%的水相,但工程师会建议您中途不要停流速,用完后切换到有机相;当然,如用缓冲盐,应先水把盐去得差不多了,再切换到有机相,以免盐析出。
    “岛津的液相使用纯乙腈体系容易使单向阀中的宝石求粘连”这个有根据吗?

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  • happy王子矜

    第2楼2010/01/28

    如果你要保存柱子,不一定用纯乙腈,90%的也可以。这样切换简单。

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  • 有水有渝

    第3楼2010/01/28

    应助达人

    流动相比例可以根据自己仪器状况调整试一下,没有必要完全按文献的做法。

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  • diaryfly

    第4楼2010/01/28

    我平时都是用90%的乙腈水来保存的!

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  • diaryfly

    第5楼2010/01/28

    没有必要一定用甲醇来保存的!乙腈也可以

    violet0569(violet0569) 发表:最近做氨基酸的分析,要用到梯度洗脱,请各位高手指点一下。

    我知道一般梯度洗脱都应该用初始条件平衡色谱柱,然后再运行两个空白梯度。可是文献上大部分氨基酸分析的初始条件都是用纯缓冲液冲0.5-1min,然后再逐渐升高有机相的比例。我用的是C-18柱,如果用纯缓冲液平衡色谱柱,会不会对柱子有影响?不是说用纯水冲容易使柱子的烃基毛倒伏,并缩短柱子寿命吗?

    另外,我用的是岛津的液相,流动相体系是:A 缓冲盐 B 60%的乙腈。岛津的液相使用纯乙腈体系容易使单向阀中的宝石求粘连,这样的话我能不能使用贾春来封柱子,使用时再用乙腈体系平衡?由于流动相是乙腈体系,我不知道用甲醇封柱子会对实验重现性方面产生影响吗?

    谢谢啦!!!

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  • 安平

    第6楼2010/02/02

    应助达人

    可以用70%乙腈水溶液保存柱子

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  • violet0569

    第7楼2010/02/04

    谢谢大家的回复 学习了

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  • taolf

    第8楼2010/02/04

    我用岛津的液相也是这情况,乙腈比例高了,单向阀就堵,基本上无法做梯度

    muziying114(muziying114) 发表:能不能用纯水主要看柱的特性,Waters的反相柱就可用100%的水相,但工程师会建议您中途不要停流速,用完后切换到有机相;当然,如用缓冲盐,应先水把盐去得差不多了,再切换到有机相,以免盐析出。
    “岛津的液相使用纯乙腈体系容易使单向阀中的宝石求粘连”这个有根据吗?

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  • 安平

    第9楼2010/02/10

    应助达人

    用乙腈-水体系就可以。

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  • 东风恶

    第10楼2010/02/10

    这样是做好的方法啊!
    一个是不会用太多时间去配制流动相。
    乙腈和水下次做氨基酸分析平衡很快。

    安平(byron1111) 发表:用乙腈-水体系就可以。

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