【求助】怎么解决前延峰

你换过其他色谱柱吗？

这有2个方法可以参考下：
1.C18色谱柱(5μm)，以甲醇-水(1：1)为流动相(流速1．0mL／min)，以咖啡因(0．1g／L)为内标，检测波长200nm。
2.C18(5 μm，4.6 mm×150 mm)，流动相为ψ(pH=3的0.3%二乙胺∶乙腈）=70∶30，内标物为对羟基苯甲酸乙酯，流速1.0 mL/min，紫外检测波长195 nm，柱温20 ℃，内标法定量。

谢谢你的回答，我没有换过色谱柱，也考虑换换看，第一次用HPLC，而且没专人指导，有点晕，我是要做ctx溶解在NS中的稳定性，可以不用内标法吗。

可能是样品过载啊!!减少进样量看看!!或者在流动相中加入三乙胺少许

配置成0.01mol/l的三乙胺缓冲液和乙腈的流动相看看

请不要见笑，我问问怎么判断过载了？我从200mg/mL~1mg/mL都走过，除了峰高不同，前延峰都有，当然了1mg/mL那个浓度峰扁平得很难看，根本没尖角。

前缘峰几乎解决不了

最好换方法！！！

应助达人

取环磷酰胺适量用乙醇少量溶解，再用流动相稀释，最后配成0.02mg/ml的浓度，1mg/ml的你都扁平峰了，怀疑更高的深度走出来的是什么样的，前延可能是你用纯乙腈当溶剂引起的溶剂效应和稍微的柱过载有关系，再不行只能考虑换一色谱柱。

将色谱柱倒过来用试试，用完之后将其按正向冲洗。

真的很谢谢大家的解答，给了我很多提示。虽然1mg/mL浓度的那个峰型不怎么样，浓度高点峰型倒是不错的。我明天试试先用乙醇溶解再用流动相溶解看能解决前延峰吗。还有个问题，我今天换了个内标，用异环磷酰胺，两者的出峰时间相差1.5分钟左右，是不是太近了？有办法让他们分开点吗？同一瓶环磷酰胺和异环磷酰胺的混合液，下午走的图谱比上午走的图谱在主峰前多了很多小峰，这是为什么呀？