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【求助】新手求助-柱后衍生,进样量大,峰面积波动较大~急~

液相色谱(LC)

  • 现在接受的这个品种,需要用柱后衍生,以前没有做过,用的是Agilent1200+Pinnacle PCX,因为本品规格为0.2mg,所以进样量为200ul,但是进样下来,对照6针的样品主峰面积波动较大,RSD超过2.5%,再复测的时候,发现峰面积不规律变化,例如同一份对照溶液的连续进3针:150.3、151.6、134.5,过1小时后该溶液再连续进3针:162、131、110.4。
    是不是进样量太大,紧密度不好?还是柱后反应不完全?但是样品连续进样2针的重复性还好,例如:157.2、157.9.但偶尔也会出现同对照品溶液一样的问题,两针之间峰面积相差太大。
    为这个事情很是头疼,请各位做过柱后衍生的大虾,或者做过需要进样200ul,甚至进样更多体积品种的大虾们帮帮忙,传授下经验吧~碰到这样的事情,该怎么办呢?急~~先谢谢大家了~~
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  • 有水有渝

    第1楼2010/03/29

    应助达人

    1、楼主做的是什么样品,用的是什么衍生剂,浓度多少?
    2、不能通过提高溶液浓度来降低进样量吗?
    3、能不能做一个柱前衍生进行对比?
    这个分析方法是自行开发的还是有标准?

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  • zly_0428

    第3楼2010/03/29

    1、我们做的是伏格列波糖,衍生试剂配置为:6.25g牛磺酸和2.56g高碘酸钠,加水溶解,稀释成1000ml。
    2、我们也有做过将样品浓度提高一倍,进样量改为100ul,但是结果并不理想,主成分峰面积波动还是很大。
    3、柱前衍生没有做过,不知道该怎么进行对比,还请您指教~谢谢~
    4、该标准时自行开发,暂无国家标准。

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  • taotaohu

    第4楼2010/11/08

    如果是这样,说明柱后衍生反应不稳定,影响反应的主要因素有:
    温度\药量\时间
    要不断试才知道的

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  • yuying8091

    第5楼2010/11/09

    把衍生反应管的长度增加并放在恒温箱中,温度自己摸索

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