【求助】梯度洗脱的问题

23.5min估计是因为梯度溶剂的变化造成，前面一个就不知道怎么回事

应助达人

25.5min处那个还能理解为梯度变化，13min那个就不好解释了，楼主那个图是注入什么样品得到的，采用不进样方法采集梯度变化基线看看，检查一下进样器和流动相等有没有被污染，还有你用的是标准方法吗，梯度变化率有点大？

上面2个图就是不进任何样品的 梯度洗脱时的 基线变化。

目的是检测流动相B里有没有杂质超过3mAU的峰（210nm）和0.5mAU（254nm）

我认为都是溶剂效应造成的。大概在两相交换的中间附近出现的鬼峰。

thong0421(thong0421) 发表:C18 100mm×4mm 0.5um柱

梯度程序 A相纯水 B相乙腈 ，不进样品。运行前均用溶剂B清洗半小时，1mL/min

时间	溶剂B%
1.00 min	10%
17.00 min	90%
23.00 min	90%
24.00 min	10%
35.00 min	10% 210nm

问题：为什么每次在约13min和25.5min处总是 有1个比较大的吸收峰？
请专家帮我看看图

建议把梯度区间缩小，斜率降低，这样的话溶剂效应就会大大降低。

梯度设置不合理，建议在中间增加阶梯，使A、B两相过渡平稳一些，以减少溶剂效应。

应助达人

你用的是自动进样器，还是手动进样器，流动相重新配制一下试试。多采集几次空白，未知峰有没有减少的趋势？

做梯度实验，我做的多了。13分钟的峰有可能是柱污染，多进几次空白，观察峰高的变化，如降低就是污染，如一直不变，有可能就是梯度造成的，扣除就行了。

感谢 大家！