秘诀1:由强到弱: 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验, 这样可以很快地得到分离结果,然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
秘诀2 三倍规则 :每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量,保留因子约增加3倍,此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中,注意观察各个峰的分离情况。
秘诀3 粗调转微调:当分离达到一定程度,应将有机溶剂10%的改变量调整
只是一直不知道何为“保留因子”,请教各位了
微雨燕双飞
第5楼2010/04/16
由上面的公式推导,k=(tR-t死)/t死
上面是关于保留因子最好的解释。简言之,保留因子是反映色谱柱对化合物保留特性的参数,其值越大,化合物在该分析条件下的保留时间越长。
保留因子给我们最好的指导在于,等度情况下,化合物的保留因子处于1~10之间时能够同时满足分离和较好的灵敏度。举个例子,当您使用250*4.6 mm,5微米的色谱柱,1 mL/min的体积流速,死时间约为2 min,如果化合物的保留时间小于4 min,其在色谱柱上的保留太差,不利于分离;如果保留时间超过22 min,也许分离较好,但是分析时间太长,并且峰展宽较严重,灵敏度不高。
下面是一份色谱理论的ppt,也许对您有帮助。