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【讨论】酶标仪和分光光度计的区别,继续。。

  • 高卧东山
    2010/05/19
  • 私聊

生命科学仪器综合讨论

  • 课题组有一同学苦于某个实验样品量太多,想用酶标仪代替分光光度计测定OD值。毕竟比色皿一个个测多辛苦,哪有酶标板来得顺畅。
    我虽然觉得这个想法有点crazy,但一时也找不到太多反驳的理由。
    毕竟两者原理几乎一样,而且酶标仪似乎功能更加全面;
    可是如果真的可以完全通用,为什么那些方法和标准里为什么只字不提仪器可以是“紫外-可见分光光度计或连续波长酶标仪”呢?

    思来想去还是决定先在网上查个意见
    于是我在本坛挖出了06年的一个帖子 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20060414/393995/

    这里面某些说法就不必再提了,肯定不是答案。
    比如一个测的是光密度一个测的是吸光度的说法。其实OD和absorbance根本就是一回事(见http://en.wikipedia.org/wiki/Absorbance
    又比如酶标仪用的是滤光片的说法。现在在科研领域,连续波长的酶标仪早就普及了,相对而言医用酶标仪还常有使用滤光片的。

    我还见过一种说法,说一个是垂直光路一个是水平光路。此话倒是不假,可这种说法无法解决我的疑虑。作为终端用户,关注的只是准不准,符合不符合检测要求,至于实现的技术手段那是黑猫白猫的事情了。

    不过,在那个帖子的最后一层,我看到这么一种说法

    “分光光度计测量的是以空白溶液为参比,在约定厚度(一般为1cm)的量池中的相对吸光值。因此不同仪器,不同批次测量的数据具有同样的可比性。而酶标仪测定时其光路长度不确定,也无空白参比,得出的是特定条件下的绝对值,因此即使是同一台仪器,不同测量批次之间也其数据不具备直接的可比性。”

    我觉得这种解释很有新意,而且似乎也颇有道理。但遗憾的是,话题直到这里就终结了,于是我想把这个话题继续,大家不妨来讨论一下,到底酶标仪和分光光度计有什么重要差别使得至今没有完全通用呢?
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  • wzwcs007

    第1楼2010/05/20

    我也很疑惑,很关注~~我也想知道答案~顶上,请牛人解答~

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  • 高卧东山

    第3楼2010/05/22

    不过我再想一下,绝对值、相对值的说法也没有太大意义

    因为即便如此,只有每板都做一个标准曲线用于校正,那么每次的误差就足以被消除了..

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  • It is me!

    第4楼2010/06/02

    我觉得如果不是需要什么标准的话,仅仅作为实验结果的话是可以使用酶标仪的。

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  • 高卧东山

    第5楼2010/06/04

    我现在也觉得目前没有什么理由认为不能通用

    It is me!(hmzhou83) 发表:我觉得如果不是需要什么标准的话,仅仅作为实验结果的话是可以使用酶标仪的。

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  • gybgyb

    第6楼2010/06/04

    最后一个解释是有道理的:
    OD值和吸光系数, 待测组分的浓度, 还有光路长度成正比关系。分光光度计采用的比色杯的宽度都是1cm, 而酶标仪采用的是垂直光路, 所以光路的长度应该是样体液面的高度。所以测得的值受到样品的体积的影响, 现在有些酶标仪可以通过软件将光路转化为1cm光路长度下的吸光值, 这样就不会受到批次的影响, 而且还可以与分光光度计测得的值进行比较。供参考

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  • zwyu

    第7楼2010/06/04

    认同该说法。每次拿移液枪往里加样品,是很难保证加的完全一样的。而且,空白的确定也是个问题。



    高卧东山(littlewing) 发表:不过,在那个帖子的最后一层,我看到这么一种说法
    “分光光度计测量的是以空白溶液为参比,在约定厚度(一般为1cm)的量池中的相对吸光值。因此不同仪器,不同批次测量的数据具有同样的可比性。而酶标仪测定时其光路长度不确定,也无空白参比,得出的是特定条件下的绝对值,因此即使是同一台仪器,不同测量批次之间也其数据不具备直接的可比性。”
    原文由 gybgyb(gybgyb) 发表:最后一个解释是有道理的:
    OD值和吸光系数, 待测组分的浓度, 还有光路长度成正比关系。分光光度计采用的比色杯的宽度都是1cm, 而酶标仪采用的是垂直光路, 所以光路的长度应该是样体液面的高度。所以测得的值受到样品的体积的影响, 现在有些酶标仪可以通过软件将光路转化为1cm光路长度下的吸光值, 这样就不会受到批次的影响, 而且还可以与分光光度计测得的值进行比较。供参考

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  • 高卧东山

    第8楼2010/06/07

    楼上两位说得很好。

    理论上这样讲没错,不过实际影响究竟如何还要考虑一下。比如移液枪的误差,每次肯定是很难完全一样。但熟练的操作人员应该能保证足够的精确度。可以这么想,定量PCR的量不也完全是靠枪来控制的么?初始模板的量只要稍有差异,最后结果就会被放大至数量级的误差。可是定量PCR也能做到平行的重现性极好啊。

    批次的问题更好解决了。每次做一组校正曲线,那么仪器状态的差异基本上就做为系统误差消除了。定量PCR也是这么做的。

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  • zwyu

    第9楼2010/06/07

    能不能这样想:那些标准的制定者考虑的是不要主动增加难度(包括操作、人员培训)或仪器成本,如你所言,现在好的连扫PCR确实可以干简单的紫外分光光度计的活;但是与UV比起来,其仪器普及率、人员熟练度等,从统计意义上肯定是远远不如了。就像有些紫外分光光度计测的东西,你非上带UV检测器的液相去测,可能也能得到差不多准确的结果,可你能在相关标准中再加上一句“或带UV检测器的LC”吗?

    高卧东山(littlewing) 发表:楼上两位说得很好。

    理论上这样讲没错,不过实际影响究竟如何还要考虑一下。比如移液枪的误差,每次肯定是很难完全一样。但熟练的操作人员应该能保证足够的精确度。可以这么想,定量PCR的量不也完全是靠枪来控制的么?初始模板的量只要稍有差异,最后结果就会被放大至数量级的误差。可是定量PCR也能做到平行的重现性极好啊。

    批次的问题更好解决了。每次做一组校正曲线,那么仪器状态的差异基本上就做为系统误差消除了。定量PCR也是这么做的。

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  • tianyucai

    第10楼2010/08/31

    个人认为国家标准是要兼顾整个国家的检测水平、仪器配置、人员专业水平的。我想现在很多地方都没有配酶标仪吧,你把标准写上去,那不是好多地方都不能达标了。
    中国很多国家标准都是相对滞后的

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