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【求助】HPLC 测苯甲酸不出峰是怎么回事?

液相色谱(LC)

  • 液相(二极管阵列检测器,waters C18柱,250mm*4.6mm,)测苯甲酸(0.5mg/mL,甲醇配制),流动相5:95的甲醇和水,30min样品不出峰。 流动相的比例换成梯度,样品在十几分钟(甲醇/水为70:30)出一个很宽的大包(约宽3-4min)。 我们用的色谱柱是新的,是不是柱子的极性太强,还是需要在流动相中添加离子缓冲剂,例如醋酸铵?
    各位有没有这方面的经验,望多多指教。谢谢!
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  • 跳来跳去的毛毛

    第1楼2010/05/24

    增大甲醇的比例,增大到35%再试试,可以用缓冲液代替水,比如磷酸二氢钾。
    甲醇效果不好用乙腈。

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  • wanxiaolongsioc

    第2楼2010/05/24

    流动相中加点酸试试。

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  • 柏坡

    第3楼2010/05/24

    WATERS哪款柱子?缓冲盐 酸性条件试试。

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  • johne0212

    第4楼2010/05/24

    Mobile phase for HPLC: ammonium acetate 5 mmol/L – acetonitrile (7+3)
    Into a HPLC container, mix 700 mL ammonium acetate buffer solution and 300 mL acetonitrile.

    Prepare this solution fresh daily


    给你流动相的配比,另外,色谱柱C18 250*4.6mm

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  • weiyh_001

    第5楼2010/05/24

    应该使用甲醇-1%醋酸溶液(40:60)就可以了。

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  • 老多_小多

    第6楼2010/05/24

    很宽的大包也许就是
    都是不会要这么大的甲醇比例啊?你的标准液也有问题,浓度太高,为什么不按标准做?

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  • bzj

    第7楼2010/05/25

    那个很大的包,通过光谱扫描,应该是苯甲酸的峰。流动相的比例用那么大,是因为甲醇含量低了,样品不出峰(大包也不出)。
    国标GB/T 5009.29-2003标准储备液的浓度是1mg/mL, 标准混合液的浓度是0.1mg/mL. 我配的0.5mg/mL也不是很大,因为出的那个包的峰面积并不是很大,况且我是想看看苯甲酸中有什么杂质。

    老多_小多(emoc98311) 发表:很宽的大包也许就是
    都是不会要这么大的甲醇比例啊?你的标准液也有问题,浓度太高,为什么不按标准做?

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  • bzj

    第8楼2010/05/25

    多谢,我试试。乙腈太贵了,最好还是甲醇能行。

    跳来跳去的毛毛(maomao3323) 发表:增大甲醇的比例,增大到35%再试试,可以用缓冲液代替水,比如磷酸二氢钾。
    甲醇效果不好用乙腈。

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  • bzj

    第9楼2010/05/25

    waters SunFire C18 5微米
    4.6*250 mm色谱柱

    柏坡(hgycook) 发表:WATERS哪款柱子?缓冲盐 酸性条件试试。

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  • mxqiong

    第10楼2010/05/25

    用甲醇和醋酸铵做流动相就可以,甲醇的比例5-10之间就可以。另外,这个好像用150的柱子就够了。

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