【求助】流动相如何配置

1、三乙胺溶液用磷酸来调啊！
2、第二个问题是：先把17mmol/L三乙胺溶液的pH调到5.65，然后再与140mmol/L乙酸钠溶液和1μg/mlEDTA二钠盐混合后。为A液

三乙胺溶液用10%磷酸调

应助达人

楼主测的是什么样品中的甘氨酸成分，药典中的不是用电位滴定测的氨基酸吗？能不能把药典中的原文发上来？

本法系依据过量的6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯（AQC）在一定条件下和氨基酸形成稳定的衍生产物（柱前衍生），用高效液相色谱法测定衍生产物，根据衍生产物的含量计算甘氨酸含量。
照高效液相色谱法（附录III B）测定
色谱条件和系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为基质的C18反相色谱柱，颗粒度4μm，内径3.9mm,柱长150mm；柱温为37℃;以140mmol/L乙酸钠、17mmol/L三乙胺pH 5.65、1μg/mlEDTA二钠盐为流动相A液，以100%乙腈为流动相B液，以纯水为流动相C液,流速为每分钟1.0ml，梯度洗脱32分钟（见梯度表），检测波长为248nm。甘氨酸与相邻色谱峰之间分离度应≥1.5；拖尾因子（T）为0.95～1.40之间(甘氨酸和α-氨基丁酸峰)。重复性RSD≤2.0%（甘氨酸对照品峰面积测量值）。

内标溶液的制备 精密称取α-氨基丁酸对照品 4.0g, 加超纯水至100ml定容。

对照品溶液的制备 (1)精密称取甘氨酸标准 2.5g加超纯水至100ml定容。(2) 精密量取(1)项氨基酸标准溶液1.0ml，加9.0ml 1.5%磺基水扬酸，混匀静置2小时以上3000rpm离心10分钟，留取上清备用。①分别精密量取上清液50μl、100μl、125μl、150μl、200μl，置10ml容量瓶中，用纯水定容。②分别精密量取①项中各甘氨酸标准溶液0.1 ml，加0.4ml纯水，加内标0.02ml混匀备用。精密量取(2)②项甘氨酸标准溶液10μl放入衍生管中加70μl硼酸缓冲液(pH8～10)涡旋混和并加入20μl AQC衍生剂涡旋混和15秒，备用。供试品溶液的制备 精密量取供试品溶液1.0ml，加9.0ml 1.5%磺基水扬酸，混匀静置2小时以上3000rpm离心10分钟，留取上清备用。（1）精密量取离心上清液1.0ml，置10ml容量瓶中，用纯水定容。（2）精密量取（1）项中供试品溶液0.1 ml，加0.4ml纯水，加内标0.02ml混匀备用。精密量取(2)项供试品溶液10μl放入衍生管中加70μl硼酸缓冲液涡旋混和并加入20μl AQC衍生剂涡旋混和15秒, 备用。

测定法 精密量对照品溶液与供试品溶液,分别注入液相色谱仪，记录色谱图32分钟。进样量为10μl。按内标法计算。

时间    流速    A液    B液    C液    曲线
分钟    ml/min    %    %    %    　
起始    1    100    0    0    *
0.5    1    99    1    0    瞬时
18    1    95    5    0    线性
19    1    91    9    0    线性
22    1    83    17    0    线性
25    1    0    60    40    瞬时
28    1    100    0    0    瞬时
32    1    100    0    0    线性

附注： (1)甘氨酸含量测定应采用柱前衍生及内标法,除本法要求外衍生剂也可选用异硫氰酸苯酯（PITC）, 邻苯二甲醛(OPA);内标物也可选用正缬氨酸; C18反相色谱柱的颗粒度也可选用5μm或亚二微米。根据液相色谱系统、C18反相色谱柱规格、衍生剂及内标物的不同可以调整相应的色谱条件。

(2)直线回归相关系数应不低于0.999。

(3)系统适应性中重复性可用其它适宜方法。

（4）本法也适用于血液制品中组氨酸和精氨酸测定，仅对照品改为相应的组氨酸或精氨酸。
是三部药典中的。
问题是三种溶液按照什么比例混合？只有浓度，药典也说得太不清楚了。

A液怎么配？有谁知道，说具体点。

应助达人

没写A液是怎么配制的，我想应该是先配制140mmol/L乙酸钠、17mmol/L三乙胺，这两个是在同一份溶液里（不是分别配制后再混合的），然后用磷酸或乙酸调节PH至5.65.在调好PH的溶液中加入适量的EDTA二钠盐，使之浓度为1μg/ml，即成A液。

谢谢楼上的，我想也只有如此了，先把三种物质配一块，调pH至5.65试试看了。

请问用液相色谱法测对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐的流动相怎么配制?(用面积归一法)

请问用液相色谱测对羟基苯甘氨酸的流动相是怎么配制的?(用面积归一法)
我现在用的流动相是v甲醇:v磷酸氢二钠缓冲液(0.05mol/L)=30:70,结果测出的谱图拖尾因子比较大