【求助】分离RNA和小分子有机物

您好！我对临床方面不太熟悉，但是42个BP的双链RNA分子分子量大概20000多，N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]的分子量约200多，分子量差异较大，分离应该不成问题吧？我们有凝胶排阻的层析柱，理论上可以将差异较大的分子分开，原理是分子筛机理。最小规格是1mL的。

具体的您的样品是什么状态？期待得到的是RNA吧？除去N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]？分离主要难点是什么？如果能够告知详情，或许可以帮助您！

我们对临床方面不太了解，还请见谅！希望我可以帮到您！

可以试试电泳。

谢谢您的帮助，我实验室这样的siRNA-NH2，N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]，siRNA-NH-CO-CH2-CH2-C6H4-OH(不知道怎么读)的混合物，我要除去N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]，分别得到两个含siRNA的产物。实在没想出办法能把两个含siRNA的产物分开，万般无奈之下才打算只分N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]。您能指导下怎么把三者分开吗？如果没办法，那么用凝胶排阻层析，具体您有什么推荐吗？

谢谢您的意见，我产物量太少，我担心电泳不好回收。

谢谢您的帮助，我实验室这样的siRNA-NH2，N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]，siRNA-NH-CO-CH2-CH2-C6H4-OH(不知道怎么读)的混合物，我要除去N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]，分别得到两个含siRNA的产物。实在没想出办法能把两个含siRNA的产物分开，万般无奈之下才打算只分N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]。您能指导下怎么把三者分开吗？如果没办法，那么用凝胶排阻层析，具体您有什么推荐吗？[/quote]

RNA和小分子，由于分子量差异较大，可以采用凝胶排阻层析柱，两个RNA分子量相近，只能依靠两个RNA的亲疏水性差异来分了，利用疏水层析法，将两个RNA分开，应该用苯基层析柱可以。不过，这个只是理论上的分析，需要实际操作，试验一下，不知道有没有查过相关文献？文献上应该会有此方面的办法吧？

假如其中一个RNA有特异性亲和配体，也可以用亲和柱来纯化。

您的样品是什么？样品量多少？方便告知？

仅供参考！

RNA和小分子，由于分子量差异较大，可以采用凝胶排阻层析柱，两个RNA分子量相近，只能依靠两个RNA的亲疏水性差异来分了，利用疏水层析法，将两个RNA分开，应该用苯基层析柱可以。不过，这个只是理论上的分析，需要实际操作，试验一下，不知道有没有查过相关文献？文献上应该会有此方面的办法吧？

假如其中一个RNA有特异性亲和配体，也可以用亲和柱来纯化。

您的样品是什么？样品量多少？方便告知？

仅供参考！[/quote]
我样品是siRNA-NH2，siRNA-NH-CO-CH2-CH2-C6H4-OH和N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]的混合物。混合物中siRNA-NH2和siRNA-NH-CO-CH2-CH2-C6H4-OH一共最多10nmol。
目前没人这样做过，所以没查到文献。两种siRNA的亲和性是一样的。
您推荐的苯基层析柱是用于HPLC的吗？能推荐一下具体方法吗？
谢谢！

如果样品不是那么珍贵的话，可以试试多种方法，像这种不常见的分离纯化，可能没有现成的方法可用。

HPLC 方法，据我所知，应该是做分析用的吧？可以纯化制备吗？

我班门弄斧了，呵呵