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【讨论】血浆样品及胆汁、尿液前处理方法

  • huafeihua123
    2010/08/14
  • 私聊

前处理综合讨论

  • 悬赏金额:20积分状态:已解决
  • 大家讨论一下:血浆样品处理方法的前处理方法哪个好,比如液液萃取,还是沉淀蛋白法好?
    有听说血浆样品用沉淀蛋白法比较好,胆汁尿液之类的样品用液液萃取法比较多,大家有什么经验分享一下吧

yanliangping 2010/08/24

在药代也混了10来年了。 原则上,不管是啥基质,PP沉淀蛋白, LLE 液液萃取,固相萃取都无所谓,只要回收率稳定就行。 PP快速有效,确定可能有随柱子寿命,预柱或在线过滤器必须有,否则没几针柱压就上去了。本人觉得这种方法只适用于样品较少的非GLP项目,向discovery dmpk等,不过现在好多做临床或临床前新药申报资料的图省事也用PP,实乃不太严谨。 LLE 较PP干净,可以浓缩提高LLOq,但稍费事,大多数的要求较高的实验应该用这种方法,只要找到合适的溶剂,稳定的回收率;该方法还是最可靠的,重复性稳定性都是最佳的。 固相萃取,在线柱切换,多位[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]都是适用于研究性质的项目,不要忘了药代实验室是工业领域,美国的药代工业指导原则。 做药代国内的实验室现在大都效率较低, 加空白血浆,内标,溶剂等小于200 ul的应该使用连续加样器,效率比单纯的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]快10倍,样品多的话 加萃取溶剂用瓶口[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]分液器[/color][/url],比[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]快5倍。 吹干用能带水浴加热的多孔氮吹,孔越多越好 振荡萃取用多管涡旋振荡器(一次半分钟72个样品),比手拿着单个振荡效果不知提高多少。 我知道的一个实验室8个人,一天做1500个样品, 这就是效率 干药代工业事业,必须要好的工具

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  • hiei

    第1楼2010/08/18

    应助达人

    样品的前处理方法和你检测的项目有关。

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  • huafeihua123

    第2楼2010/08/19

    我做药代动力学,现在做血浆样品

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  • dmchen1027

    第3楼2010/08/19

    一般来说,血浆样品要注意沉淀蛋白,避免大分子进入色谱柱,否则色谱柱很容易堵。尿样,一般用液液萃取,在根据要去性质,最好进行如固相萃取等净化过程。

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  • huafeihua123

    第4楼2010/08/19

    我现在用的是乙酸乙酯萃取的,做了一段时间,现在保留时间往后推了大概0.2秒,而且一开始柱压没有升的很快,最后几次测样时柱压有点小高,会后来冲冲就又下去了

    dmchen1027(dmchen1027) 发表:一般来说,血浆样品要注意沉淀蛋白,避免大分子进入色谱柱,否则色谱柱很容易堵。尿样,一般用液液萃取,在根据要去性质,最好进行如固相萃取等净化过程。

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  • yanliangping

    第5楼2010/08/22

    最好是液液萃取,固相萃取太繁琐,昂贵

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  • wjs74

    第6楼2010/08/23

    能用固相萃取比较好,可以同时除盐、去蛋白和去脂

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  • 职业游民

    第7楼2010/08/23

    一般都是去除蛋白以后用固相萃取,到免疫方法中相对简单一些,主要是去蛋白即可

    尿样的检测一般比较麻烦,应为里面的成分比较复杂,过柱基本上是必须,

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  • huafeihua123

    第8楼2010/08/24

    固相萃取对我们来说有点不太现实。。。没条件

    wjs74(wjs74) 发表:能用固相萃取比较好,可以同时除盐、去蛋白和去脂

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  • huafeihua123

    第9楼2010/08/24

    指的是固相萃取小柱还是预柱啊?

    职业游民(012304) 发表:一般都是去除蛋白以后用固相萃取,到免疫方法中相对简单一些,主要是去蛋白即可

    尿样的检测一般比较麻烦,应为里面的成分比较复杂,过柱基本上是必须,

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  • 若初

    第10楼2010/08/24

    要回收率和基质效应都没什么问题时,用甲醇或是乙腈沉淀较好,操作方便还能除去蛋白。不行的话在考虑提取,提取麻烦点。在不行的话用固相萃取或是液液萃取。胆汁,尿和粪最好过柱,能除去很多杂质~

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