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【求助】鱼体脂肪酸测定结果疑问

气质联用（GCMS）

  • 最近打算GCMS测定鱼体（淡水鱼和海鱼）肌肉中脂肪酸含量，前处理后上GCMS测定，结果与10来篇文献比较后，发现不管海鱼还是淡水鱼中DHA和EPA 的相对百分含量比文献低很多，分别都只有百分之零点几，而一般文献海鱼都有10％左右，而C16:0,C16:1;C18:0,C18:1占了绝大多数，总计估计有75％以上;不知道大家碰到过这种情况麽？是前处理方法，还是本身样品问题（样品是1年前冷冻干燥后粉碎－20度冰箱保存）？抑或就是这个结果？
    前处理：脂类提取试了Bligh and dyer 方法和正己烷丙酮索氏抽提2种，2种方法结果差不多
    甲酯化采用2%的硫酸甲醇溶液酯化。

    具体如下：


    一．脂肪提取（Bligh and dyer 方法，1959），索氏抽提方法就不写了。



    1，玻璃试管内，30mg左右样品加3.75ml （氯仿：甲醇）（1：2），加内标c17酸，混合均匀（涡旋）

    2，再加1.25 ml 氯仿，混合均匀（涡旋）

    3，加1.25 ml 水，混合均匀（涡旋）

    4，3000rpm离心10min，待 液体分层明显后

    5，吸管伸入液体下层（有机相，氯仿层），吸取有机相，转移至新瓶中

    6、提取液过无水硫酸钠，除水后，

    7，氮吹近干，准备酯化



    二、甲酯化

    1， 加入0.1 ml 苯加0.5 ml 含2％硫酸的甲醇，水浴68度 2 h

    2， 结束后，加入2 ml 水，混合均匀

    3， 再用正己烷（）提取3次，合并3次提取液

    4， 旋蒸，近干，
    5， 转移至样品瓶，氮吹，近干

    6， 加1ml异辛烷，待上机。

    再上个实际样品图吧
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    +关注 私聊

  • symmacros

    第1楼2010/08/24

    应助达人

    会不会会保存时间久游关系？另外就是DHA和EPA 甲酯化彻底不彻底？

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    +关注 私聊

  • zhangdp

    第2楼2010/08/25

    混标是27种，为了完全分开，DHA只好拖到76min左右出来，EPA是54min左右。
    DHA和EPA 甲酯化彻底不彻底－我也不好判断，但用的方法肯定是比较成熟的，只是不知道有没有哪个细节没注意到。另外加入c17酸，做了整个流程回收率为80％左右，但c17酸肯定游离态的。

    symmacros(jimzhu) 发表:会不会会保存时间久游关系？另外就是DHA和EPA 甲酯化彻底不彻底？

0
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  • zhangdp

    第3楼2010/08/25

    是发错版面了麽?看帖子的都这么少啊

0
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  • tomdreams

    第4楼2010/08/26

    原因分析：

    主要是甲酯化不充分，衍生问题，因为长链的脂肪酸甲酯化不如短链容易！

    DHA和EPA都是多不饱和脂肪酸，很容易被氧化掉，衍生时要加入抗氧化剂！

0
    +关注 私聊

  • zhangdp

    第5楼2010/08/26

    嗯，抗氧化剂可能是个问题，一些文献里用了BHT，一部分文献里就没有。但我感觉差别有这么大麽。因为差别都是数量级上的。
    我也去试试吧

0
    +关注 私聊

  • zhangdp

    第6楼2010/08/26

    －如果被氧化掉，EPA和dha生成什么？分别变成饱和的c20和c22？

    tomdreams(tomdreams) 发表:原因分析：

    主要是甲酯化不充分，衍生问题，因为长链的脂肪酸甲酯化不如短链容易！--延长甲酯化时间还是温度？文献上大部分是70度+2小时

    DHA和EPA都是多不饱和脂肪酸，很容易被氧化掉，衍生时要加入抗氧化剂！

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  • symmacros

    第7楼2010/08/26

    应助达人

    也看到过衍生时，加入抗氧化剂和稳定剂（虽然不是有机酸甲酯化）。

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  • zhangdp

    第8楼2010/08/27

    买到了化学纯的BHT，没有分析纯的，今天做样试试结果

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  • zhangdp

    第9楼2010/09/03

    顶下，仪器排队中，过断时间才知道
    不知道会不会因为样品问题（放置时间太长？），如果这样，头要非常非常大了

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  • symmacros

    第10楼2010/09/03

    应助达人

    你查查DHA和EPA在鱼肉中低温下的稳定性资料看看。如有可能测定一下新鲜的鱼看看数据如何。

    zhangdp(zhangdp) 发表:顶下，仪器排队中，过断时间才知道
    不知道会不会因为样品问题（放置时间太长？），如果这样，头要非常非常大了

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