主要和大家分享我使用聚酰胺柱的经验,我一般是聚酰胺薄膜结合聚酰胺柱,类似于硅胶板结合硅胶柱。所用的聚酰胺为30-60目,聚酰胺薄膜一盒50片,规格为8cm x 8cm,70块钱左右,可以根据需要剪成条状使用。聚酰胺薄膜常用的溶剂系统说明书上有,我常用甲醇-水,因为黄酮类化合物有一定的酸性,展开剂要加点酸,甲酸乙酸都可以,抑制其解离,保持游离状态的话,样品成点性好,否则拖尾很严重。在此需要指出的是,聚酰胺可以用反相溶剂系统,如甲醇水;也可以用正相溶剂系统,如二氯甲烷甲醇。要根据自己样品的极性来定。以我的80%乙醇洗脱物为例,进行详细的叙述。此部分极性较小。我用二氯甲烷溶解,拌样,挥干。洗脱系统为甲醇水,聚酰胺柱起始用水装柱,上样,上面要放一块棉花,然后用玻璃塞子压住(聚酰胺比较轻,防止加溶剂时冲起来),甲醇水梯度洗脱。之前点板显示,50%甲醇水刚刚展开一点,因此起始用50%甲醇水洗脱,然后梯度设为55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、最后甲醇冲柱。过程中每100mL一接,蒸干转移至小瓶。最后用一大块聚酰胺对得到的流分进行合并。得到大概9-10个流分,HPLC-DAD分析,找到合适的液相色谱条件之后,用制备液相进行制备。 【部分聚酰胺薄层谱图展示】