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【原创】液相色谱操作流程

液相色谱(LC)

  • 液相色谱操作流程

    我们制定机器的操作规程,不仅是规范我们的操作,也是为了对机器的保护,换句话说,机器也有一个适应,我们长时间按习惯来操作,那么我们的机器寿命会大大加强。

    1、开机,不同的机器会有不同的识别路径,我用的日立的机子,如果你先开色谱,在开电脑主机,它是不会识别的,所以根据不同的牌子我们采取不同的开关机顺序,我每次开机和关机总是相反的过程,开机:电脑主机—显示器—组织器—泵—自动进样器—柱温箱,为什么没写检测器?那是因为我们开机完成后要平衡大约两个小时,这段时间没有必要开,同时也可以延长氘灯的寿命。

    2、排气,这一步是非常重要的,不管你是否将溶剂过滤头拿离液面,排气没有特别的规定,我觉得以2分钟左右为宜,太短起不到应有的效果,太长浪费我们的流动相。

    3、冲洗色谱柱:色谱柱一般保存在有机溶剂当中,处于静态,突然要改变状态运动起来,其中组分必然发生变化,我们为了降低其产生的影响,刚开始应以小流速为宜,如0.5ml/min0.8ml/min1mo/min依次递增。此处可以理解为我们开车同样的道理。有好多人认为,流动相组成发生变化不会影响到柱子,我个人认为这种认识是错误的,大家想我们从秋天慢慢过渡的冬天生理生理上不会有太大反应,可是如果从夏天呢?所以我认为从有机溶剂到流动相的过渡应至少经历3次组成变化如:100%甲醇—65%甲醇水—30%甲醇水—10甲醇水—流动相。

    4、平衡:刚开始接触液相时,工程师特别强调基线必须平稳才可做样,我们铭记在心,对么?现在看来不完全对,平衡的时候我们要看检测器了,看完后,因为灯也要预热必然出来的基线不平,我们只能眼睛盯着显示器看看,其实不必这样,我们可以让标样走两针,这个时间来平衡柱子已经绰绰有余了。

    5、收尾:以321的步骤就没错了。

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  • vergil

    第1楼2010/09/28

    组织器—泵—自动进样器—柱温箱还有检测器等这些部件的开机顺序有没有一定要求,我也想知道这个问题!

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  • liuliuhui

    第2楼2010/09/29

    平衡为什么用两个小时的时间?
    好像有点长
    我们一般情况下只平衡30分钟

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  • 〓猪哥哥〓

    第3楼2010/09/29

    这是楼主原创的吗?参加原创比赛?

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  • marchingon

    第4楼2010/09/29

    大致都是一样的,只是时间控制稍有不同

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  • 青林

    第5楼2010/09/29

    我们也是两个小时的平衡时间,对柱子比较好的保护

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  • fengxuejiao

    第6楼2010/10/06

    我们就平衡半个小时左右耶,是不是对柱子不好啊

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  • 雪妖

    第7楼2010/10/06

    这个平衡时间的长短对色谱柱没有什么关系的

    一套完整的平衡,包括运行分析程序,包括进样,得到稳定重现的峰面积保留时间等
    我一般不会死等着基线平,一般冲5个柱体积左右,我就开始进样了,开始的时候可能不好,但是运行样品的分析程序可以加快系统的平衡,特别是检测大分子量的物质时,单跑流动相,基线平了,开始的进样也不一定就好

    fengxuejiao(fengxuejiao) 发表:我们就平衡半个小时左右耶,是不是对柱子不好啊

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    第8楼2010/10/06

    感觉排气就一步,不是特别重要~
    一般情况下也不会进气泡的,呵呵~

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