【求助】柱压问题【紧急SOS】

〓猪哥哥〓

2010/10/10

私聊

液相色谱（LC）

（板油hailingfei2006）：

前提：
1之前为了建立方法，摸索液相个组分比例，调节乙腈、甲醇、20mm的磷酸二氢钾的各比例，用了一天，正常操作，没问题。
2后来换20mm的磷酸二氢钾为pH=3.66醋酸水溶液，因为红色警报问题，柱子在乙腈和甲醇，以及pH3.66的环境下，静置了2天。
3前天修好设备，正常的水-甲醇水-甲醇，冲柱子。
4昨天进样DMSO含药母液10ul一针，调节调节乙腈、甲醇、20mm的磷酸二氢钾的各比例，上午操作没问题，下午6点左右发现柱压很低，经检查发现漏液，后拧紧柱子前端的peek（对？）漏液停止，但是压力不稳，跳动很大，后经purge阀除气饱而解决。紧接着，就发现，在50：50的甲醇水当中，柱压很大，立即调节比例为甲醇水10：90，流速0.3，冲了一个晚上，至目前，柱压很高。

问题：
柱压高。表现为，水：甲醇=90：10，柱温35℃，流速1.0ml/min,柱压为152bar。

措施：
分析可能是之前用磷酸盐缓冲液造成晶体析出，所以用水：甲醇=90：10，流速为0.3ml/min冲了一个晚上，今早上来，升至流速为1.0，柱压仍未152，后来提高柱温为40℃，希望增加磷酸盐溶解，冲柱3小时，柱压稳定为146。考虑到柱压变化不大，认为可能有其他杂志，故提高甲醇比例，但是柱压立马就上来，试着纯甲醇，柱压飙升至170还在往上涨，本人立刻将流速将为零，调节至低甲醇比例。

目前，学生不知怎么办：
1是柱前压力大，还是柱后压力大？怎么操作？
2用异丙醇冲，为什么？怎么个比例和操作要求？（流速、柱温，适用条件？）
3要把柱子扯下来，超声么？用纯甲醇超声？柱子上那些配件可以去掉？
4反冲，什么情况下反冲，会不会很折寿柱子？
5柱压降到什么水平算是正常水平？（甲醇水=10：90），什么范围内我可以进行自己的实验？

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xue2009

第1楼2010/10/10

回答1：把柱子拆下来就可判断是什么引起的压力大，如果拆下来压力正常说明是柱子问题，否者是系统问题。
2：用异丙醇冲，考虑是异丙醇洗脱能力强，并且使大多数物质溶解度增大，而且使得各溶剂兼容性好。一般用10%的比例不接检测器、低流速冲洗柱子。
3：不建议超声
4：不建议反冲，但不得已反冲也行。会使得压力降低，但是会损失柱效，而且柱子用不了多久压力仍然会升高。