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【求助】多糖分子量分布GPC柱子的选择问题

液相色谱(LC)

  • 各位大虾,请教一下多糖分子量分布GPC柱子的选择问题,我想做香菇多糖的分子量分布,对照的分子量分别为10000,21400,41100,133800和2000000,样品的分子量大约为40~50万,请问我选择OHpak SB-803HQ 的柱子合适吗?
    我在网上查了一下,它的排阻限是
    100,000,粒径是 6um,规格I.D.×L(mm) 8.0 x 300。
    还有这里的排阻限是什么意思啊,是指能通过该柱子的最大分子量吗?多糖的分离与填料的粒径有何关系啊?
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  • 有水有渝

    第1楼2010/10/17

    应助达人

    直接联系各大GPC柱的代理商,把你的情况反应一下,让他们帮你选择一根合适的色谱柱,然后你再比较一下各家的性价比。
    凝胶的选择根据实验目的不同选择不同型号的凝胶。如果实验目的是将样品中的大分子物质和小分子物质分开,由于它们在分配系数上有显著差异,这种分离又称组别分离,一般可选用SephadexG-25和G-50,对于小肽和低分子量的物质(1000-5000)的脱盐可使用SephadexG-10,G-15及Bio-Gel-p-2或4.如果实验目的是将样品中一些分子量比较近似的物质进行分离,这种分离又叫分级分离。一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶,层析过程中这些物质都能不同程度地深入到凝胶内部,由于Kd不同,最后得到分离。

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  • bonly10

    第2楼2010/10/18

    首先感谢版主!"一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶"这一点我也觉得对,但是我在网上查了一下OHPak SB-805 HQ 的排阻限是400万,OHPak SB-804 HQ 的排阻限是100万,OHPak SB-803 HQ 的排阻限是10万,而我的对照品中最大分子量为200万,现在是以上三根柱子按进样器-805-804-803-2414检测器的顺序串联,这样可以吗?
    我问了一下waters 的工程师,她的回答是:这样是可以的,令我不解。望各位大虾解答我的疑惑,谢谢!

    有水有渝(xky0230699) 发表:直接联系各大GPC柱的代理商,把你的情况反应一下,让他们帮你选择一根合适的色谱柱,然后你再比较一下各家的性价比。
    凝胶的选择根据实验目的不同选择不同型号的凝胶。如果实验目的是将样品中的大分子物质和小分子物质分开,由于它们在分配系数上有显著差异,这种分离又称组别分离,一般可选用SephadexG-25和G-50,对于小肽和低分子量的物质(1000-5000)的脱盐可使用SephadexG-10,G-15及Bio-Gel-p-2或4.如果实验目的是将样品中一些分子量比较近似的物质进行分离,这种分离又叫分级分离。一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶,层析过程中这些物质都能不同程度地深入到凝胶内部,由于Kd不同,最后得到分离。

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  • 有水有渝

    第3楼2010/10/19

    应助达人

    串联当然是可以的,但就是不知道从大到小和从小到大哪个效果好,如果你手上有这三根,倒是可以试一下。

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  • tigertooth

    第4楼2010/10/19

    一般GPC都是多柱串联使用,因为GPC柱一般都有一个分离限的问题,而且柱效都不高,为了提高分离效果多柱串联比较好。

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  • bonly10

    第5楼2010/10/20

    分子量200万的不是还得要通过排阻限是100万的SB-804 HQ柱和排阻限是10万的OHPak SB-803 HQ 柱吗?能过去吗?为什么能呢?急待解答!

    有水有渝(xky0230699) 发表:串联当然是可以的,但就是不知道从大到小和从小到大哪个效果好,如果你手上有这三根,倒是可以试一下。

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  • tigertooth

    第6楼2010/10/21

    应该能够通过,但是分离不好。是否通过是由柱子的孔径决定的,0.45um的膜能通过,一般柱子都没问题,但是否能分离好就要看柱子的分离限了,高于100万的没分离就一起出来了。所以你的标线就有问题了,而且分布也侧不好。

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