【求助】检测水溶性蛋白相关问题？谢谢！

应助达人

隆丁法是用来区分蛋白质，区分为高分子、中分子、低分子蛋白质的吧？

检测水溶性蛋白？？

可以经过一定的处理程序 将蛋白提纯 并溶解在水中

然后 测定最大的吸收峰

当然 蛋白质量的测定 有很经典的哪几种( ⊙ o ⊙ )啊！

原理：高分子含氮物质在酸性溶液中，易为单宁所沉淀。磷钼酸可同时沉淀高、中分子含氮物质。低分子含氮物则不为上述物质所沉淀。因此，光侧单宁沉淀样品后所得滤液的含氮量，从总氮减去此值即得高分子氮。在测磷钼酸沉淀样品后所得滤液的含氮量。用单宁沉淀样品所得滤液的含氮量减去低分子氮，即为中分子氮。

　　仪器

　　(1) 总氮测定仪器 见大麦总氮测定的仪器。

　　(2) 恒温水浴 20+0.1℃。

　　试剂

　　(1) 总氮测定用试剂 见大麦中总氮测定试剂。

　　(2) 硫酸，比重1.4 100克硫酸加入92克水中。

　　(3) 单宁溶液 溶16克单宁于100毫升水中。

　　(4) 钼酸钠溶液 溶50克钼酸钠于100毫升水中。

　　操作

　　(1)用单宁沉淀

　　A 加100毫升样品(使其内含约80毫克左右氮)于一200毫升容量瓶中，加水到180—185毫升，加比重1.4硫酸4毫升，摇匀。

　　B 置容量瓶于20℃水浴中，保温15—20分钟，加10毫升单宁溶液，加水至刻度，摇匀，立即用折叠滤纸过滤，此滤液可重复过滤，直至滤清。

　　(2)用磷钼酸沉淀

　　A 加100毫升样品(使其内含约80毫克左右氮)于200毫升容量瓶中，加水到175毫升左右，加10毫升磷钼酸溶液，摇匀。

　　B 置容量瓶于20℃水浴中，保温15—20分钟，加10毫升比重1.4硫酸，加水至刻度。摇匀后按上述方式过滤。

　　(3)取四只消化管，第一个为空白，第二个加入5.00毫升未吸收的麦汁，第三个加入5.00毫升单宁吸收过的麦汁，第四只加入5.00磷目酸吸收过的麦汁，四只管分别加入适量的催化剂、15毫升浓硫酸，同做总氮消化、蒸馏、滴定，分别测氮含量。

　　计算

　　三个区分中氮含量分别为：

　　P(总氮)=14*N*V*20

　　T(单宁吸收后麦汁中的氮)=14*N*V

　　M(琳目酸吸收后麦汁中的氮)=14*N*V

　　A (N,毫克/100毫升)=P-T*200/5*100/100

　　B (N，毫克/100毫升)=(T-M)*200/5*100/100

　　C (N，毫克/100毫升)=M*200/5*100/100

　　三个区分中含氮量在总氮中占的百分比分别为：

　　A区分=A/P*100%

　　B区分=B/P*100%

　　C区分=C/P*100%

　　式中P—100毫升样品中总氮含量(毫克)

　　T—用单宁沉淀后50毫升滤液中含氮量(毫克)

　　M—用磷钼酸沉淀后50毫升滤液中含氮量(毫克)

　　A—100毫升样品中高分子氮的含量(毫克)

　　B—100毫升样品中中分子氮的含量(毫克)

　　C—100毫升样品中低分子氮的含量(毫克)

　　V—消耗盐酸溶液的体积

　　N-0.02摩尔/升盐酸标准溶液的摩尔浓度

　　说明

　　(1) 用单宁沉淀高分子氮对温度的变化非常敏感，最好实验室温度能保持近似20℃。若用单宁沉淀后不能立即过滤，则在继续操作前，应在20℃ 放置15分钟。在低于20℃时，滤液能重新混浊，甚至可以形成沉淀，这沉淀不能用过滤法除去。在测定滤液的含氮量前应充分摇匀。

　　(2) 硫酸和钼酸钠(NaMoO4.2H2O)作用生成钼酸，然后和试样中存在的磷酸盐作用生成磷钼酸，这样生成的磷钼酸作沉淀剂比市售的磷钼酸还好，因此操作中一般不直接加入磷钼酸，而用硫酸和钼酸钠代替。

　　结果表示方法

　　以%表示之，取一位小数。

　　正常范围值

　　A区分：25%左右

　　B区分：15%左右

　　C区分：60%左右