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【第三届原创参赛】液质之数据采集方法建立

风肃

2010/11/28

液质联用（LCMS）

[1108] 维权声明：本文为zhufengdr原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现的，均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

写在前面：今天看了版里的几个帖，觉得液质版的气氛蛮好的~

本人新手，请大家轻拍。

三重四极杆液质联用仪（后简称液质）买回来一般都花费了不少钱，最大效益化的使用成为各液质持有单位追求的目标。要实现这个目标，需要从很多方面着手：源头上，要有液质检测的需求，开拓检测领域或者有强大的现有科研或者检测任务支撑；检测过程中，需要开发快速、高效的液质检测方法，充分利用液质定性、定量上的协同高效性。

结合个人学习和实践，本人仅从数据采集方法的建立上，总结点普适的东西，加上点实践，看看能不能起到点正面作用，从中有所感受，或者从里面展出去思考，拓展、加深液质应用上的认识。希望大家积极讨论，不足之处请海涵。

下面一一道来：

普适性规则：

1. 收集资料，尤其是对已知化合物，显得尤其重要。比如分子式，结构式，化学性质，已经发表的相关检测论文，标准等等。不可忽视的一点啦，即使有标准在旁边。

拿本人实际来说，一般都是有标准作为依据的，不过我接触的标准大都信息非常不全，很多国家标准连最基本的分子式都没有，更谈不上结构式、性质啦；检测方法也是最简单化，也有可能是因为检测仪器的多样导致无法在标准中给出详细的检测方法，而且实际情况也如此，因为液质涉及液相及后续参数的多样化没法标准化，这也是目前液质没有标准谱库的原因。综上，拿到标准都要根据自己的仪器，从新验证（当然，大都时候要从新摸索）方法，找到合乎实情的检测方法。

2. 先建立质谱方法，再摸索液相方法。具体来说，液相带自动进样器的，先把色谱柱拆下来，将流动相直接接入离子源，先进单标或者混标去优化质谱端的参数，离子对的选择，碰撞能量的选择等等；当然，早期大都使用进样注射泵，建立方法的时候不会牵涉到色谱柱。等化合物MRM方法建立起来后，再优化液相的方法，这其中要根据质谱检测器的特殊性以及所适用离子源的特点，从流动相到流速、色谱柱的选择等等去优化。

个人觉得这点对新人甚或是对于单单熟悉液相、气质而没有接触过液质的同志来说尤其重要。当然，条条大路通罗马，但是这条路注定是最捷径的一条路之一。质谱作为液相的检测器，有着其不同于其它检测器的特点，拿MRM来说，实际情况接触到的大都是混合样，各种各样的基质虽然对三重四极杆来说问题不大，但在痕量情况下，很可能导致结果的偏差。

专有性体验：

1. 使用仪器：Agilent 6410B（液相为超高效，带自动进样器）；

2. 化合物：二硬脂基二甲基氯化铵。

3. 方法建立过程

3.1背景资料

二硬脂基二甲基氯化铵是一种表面活性剂，通常由碳链长度为十八和十六的烷基二甲基氯化铵混合物组成，即含有双十八烷基二甲基氯化铵、双十六烷基二甲基氯化铵以及十六烷基十八烷基二甲基氯化铵。背景就介绍这么多啦，因为结构式、分子式都在里面啦。

需要注意的是：其本身是个混合标准物，所以在建立方法的时候要注意同时采集分析三种化合物的数据。

另外，标准里有限的信息也都是精华呀，比如离子源，流动相，梯度（具有参考价值）等等。

3.2 基本的液相方法设置

3.3 基本的质谱方法设置

3.4 质谱方法的建立

拆除液相色谱柱，流动相直接接往离子源；自动进样器，序列化采集，批次分析。依据上述的基础液相、质谱方法，根据下面步骤确定质谱方法。

3.4.1 MS2Scan

建立全扫描方法，对比空白及标样。（标准中这块一般是会有的，所以这步验证验证，加深印象。）

目的：确定母离子。

3.4.2 MS2SIM

这步开始就要建立序列啦，序列的高效性真正让人体会到现代仪器带给我们的便利。

目的：优化得出最优Fragmentor，其实就是各传输电压，最优的Fragmentor电压有利于母离子有效地传输到碰撞池。

具体建立：一般都是80~140，但是也有例外，本例就是啦。所以最好是从50~150，阶梯为20，找到三个母离子最高时候的Fragmentor电压。当然，我比较保守，所以在最优Fragmentor电压附近又以5为阶梯，前后细探，确定最终的Fragmentor电压。

结果：

3.4.3 Product Ion

目的：找到母离子相对应的子离子。

途径：设立不同的碰撞能，如选择5，15，30，45进行序列进样分析，以得出母离子裂解规律。

选择子离子的条件：一般是选择母离子强度不大于20%的子离子，具体情况还得具体分析。

3.4.4 MRM

做完这步，质谱的方法就算建立啦。

目的：优化碰撞能量。

途径：结合3.4.3，在选择子离子的Collision Energy附近，以阶梯5上下建立序列方法，优化相应离子对的Collision Energy。

3.5 液相方法的建立

由于使用超高效液相，所以标准里面的方法不能完全套用，而且实验发现使用标准的流动相和本实验室的色谱柱，柱压偏高，所以就自选流动相和梯度啦：

至此，方法建立起来啦。

备注：为了不让大家迷糊，特作此备注。
1. 本例中只图描绘建立MRM方法时一个大概的轮廓，故质谱端方法建立过程中将雾化气流量、干燥气温度、离子源温度等省略，对于大多数小分子化合物来说，使用典型设置就可以满足要求了。
2. Fragmentor的定义：碰撞解离电压，其目的是将离子从毛细管出口移到截取锥，但是不足以引起分裂。因此，不同的化合物，Fragmentor也是不同的。

下面上几张美图吧：

A. 二硬脂基二甲基氯化铵MRM总离子流图

B. 494.6 -> 270.3

C. 522.6 -> 298.4

D. 550.6 -> 298.4

精
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分
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相关话题

天涯就是天地

第1楼2010/11/29

东西是比较基础，但是非常适应的。

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isee

第2楼2010/11/29

比较实际，想问下，6410用得怎么样呢？灵敏度，稳定性？

0

风肃

第3楼2010/11/29

是呀，是做三重四级杆最基础的之一啦。
天涯就是天地(tianyamzn) 发表:东西是比较基础，但是非常适应的。

0

风肃

第4楼2010/11/29

6410最大的特点，个人觉得就是非常利于上手。参数摸索上，说实话可以优化的不多，所以便利。

稳定性不错的。灵敏度嘛，我们的验收条件：ESI+，5pg利血平 S/N>500：1；ESI-，1pg氯霉素S/N>150：1，轻松达到。
isee(isee) 发表:比较实际，想问下，6410用得怎么样呢？灵敏度，稳定性？

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netsking

第5楼2010/11/30

谢谢分享，十分感谢。已经加入收藏.

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huawen19881120

第6楼2010/11/30

学习了！谢谢楼主

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风肃

第7楼2010/11/30

乐于分享，共同进步
netsking(netsking) 发表:谢谢分享，十分感谢。已经加入收藏.

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风肃

第8楼2010/11/30

共同学习，有意见欢迎提出来交流哈
huawen19881120(huawen19881120) 发表:学习了！谢谢楼主

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小猪飞飞

第9楼2010/11/30

感谢楼主分享使用心得。优化质谱锥孔电压、碰撞能量是主要的，各品牌仪器都有自己的方法，有的是自动优化，有的是手动优化。个人习惯也不同，有人喜欢用手动、定量环进样优化，有的人喜欢用真泵连续进样。

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风肃

第10楼2010/11/30

应该的，我也一直从版块中学习呢！如果有对哪怕一个版友有帮助的话，也算是回馈了吧。个人原来都是注射泵；现在的仪器带自动进样器了，非常方便；过段时间准备把优化软件用起来。
小猪飞飞(zpf20031212) 发表:感谢楼主分享使用心得。优化质谱锥孔电压、碰撞能量是主要的，各品牌仪器都有自己的方法，有的是自动优化，有的是手动优化。个人习惯也不同，有人喜欢用手动、定量环进样优化，有的人喜欢用真泵连续进样。

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