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【求助】做盐酸头孢替安有关物质检查时,液相色谱峰出峰很前沿,该选用什么样的色谱柱呢。

  • chen168168
    2010/12/07
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 最近很苦恼,之前用了大连依利特的C18 hypersil 4.6*250mm 5ul 进行盐酸头孢替安有关的质的方法检测,当时参照的方法是《美国药典USP28》盐酸头孢替安含量测定项下的色谱条件,做方法学时,色谱峰均很对称,分离度也完全符合要求,做专属性(破坏)时主峰与相邻的色谱峰也均分离完好

    可最近换了大连依利特其它的新柱时(填料 hypersil,及ODS-BP)均出现很前沿的色谱峰,换了其它的仪器也出现相同的情况,后来我又用了色谱柱inertsil ODS3 ,inertsil ODS-BP, pheaomenex-Gemini 进行试验,可依是出很大前沿峰。






    正常峰(加热破坏,色谱柱为依利特:ODS2 hypersil 4.6*250mm,5ul)

    拖尾因子1.002 理论板数5454.2 色谱柱为2005年左右购进的。





    不正常峰

    色谱柱依利特hypersil ,ODS-BP
    色谱柱inertsil
    ODS3 inertsil ODS-BP,

    色谱柱pheaomenex-Gemini

    色谱柱均为2009年新购进。

    峰形明显的前沿,峰高明显的变小,峰面积不变,峰拖尾因子达到0.5左右,理论板楼才400左右

    知道论坛里老师多,出现这样的情况到底是什么原因呢?不知道该该用什么牌子,什么样的填料也能满足我当前的试验条件。

    或许有老师也做过这个品种,用了与我相当的色谱条件,请你帮的忙,指点一下。

    或许,这里有老师也出现过与我相同或相类似的情况,请你帮的忙,指点一下。

    或许,你的经验能帮到我,请你帮的忙,指点一下。

    相信这里有很多,很多的热心朋友们。

    小女子将非常感激。


    我选用的色谱条件

    色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以硫酸铵溶液(13.6g,加水880ml溶解,用2mol/L氨水调节p H6.5-乙腈=880120为流动相;检测波长为254nm取分离溶液20ul,注入液相色谱仪,去四唑头孢替安峰对头孢替安峰的保留时间约为0.6,去四唑头孢替安峰与头孢替安峰的分离度应大于4.0.取下述对照品溶液20ul,注入液相色谱仪,理论板数按头孢替安峰计算不得低于2000,拖尾因子不得大于1.8

    取本品,精密称取适量(约含头孢替安50mg,置100ml的量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液(应临用新配)。精密移取供试品溶液1ml,置100ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液(临用新配)照含量测定项下的方法试验,精密量取对照溶液20ml注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%25%。精密量取供试品溶液和对照溶液各20ml,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主峰保留时间的2.5倍。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰,单个杂质峰面积不得大于对照溶液的主峰面积的11.0%),各杂质峰面积总和不得大于对照溶液的主峰面积的3倍(3.0%)。
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  • 冷冷的冰雨

    第3楼2010/12/07

    出峰时间早,可以调调你的流动相

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  • chen168168

    第4楼2010/12/07

    我调过了呢,可还是很前沿。

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  • 有水有渝

    第5楼2010/12/07

    应助达人

    你确定不是样品及其溶剂,流动相的问题吗,PH调节是否到位,PH计校正过没有?

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  • chen168168

    第6楼2010/12/07

    样品及其溶剂,流动相我都重复做过很多次了呢,PH调节也分别用过二台不同厂家的PH计调过,之前做方法学的那根柱子做是不问题的,但是一换了其它的柱子做就很前沿。
    现在是我以前用做方法学的那根柱子用了几个月了,有些拖尾了,所以才想换新的柱子,但是老出现前沿这样的情况,我都不知道该怎么办好。

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  • sacid

    第7楼2010/12/08

    我建议你换柱子吧。国产的柱子都存在重复性差的问题,这个我不是听一个两个人说了,我自己也深有体会。
    柱子的问题,你再调节流动相,恐怕也不行哦。

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  • chen168168

    第8楼2010/12/08

    谢谢,最近想换柱子,但不知道该换什么牌子的好,当时看了日本填料,国内分装的色谱柱inertsil –ODS3 介绍,碳含量比普通的色谱柱要高,适合抗生素的分析,试了一下还是不行。

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  • 北方海盗

    第9楼2010/12/08

    色谱峰前伸,原因很多:在不更换色谱柱的情况下,可能温度过低,或色谱柱本身损坏;在更换色谱柱的情况下,可能就是流动相选择不当,每种C18色谱柱,其C18填料有差异,例如碳载率,键合相官能团,颗粒粒度分布,孔体积大小等都不一样,例如ODS2和ODS就不完全一样,因此这时你需要适当调整流动相比例,色谱峰效果就会好。国产色谱柱质量不错,价格合理。欢迎致电大连依利特。

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  • chen168168

    第10楼2010/12/08

    ----谢谢,楼上的依利特老师,我用大连依利特的色谱柱好几年,至今试验室也常用,对于色谱柱,我想可能是当初做方法时自己没去考虑到方法的耐受性,多用几根不同厂家的柱子试试。所以弄得自己现在很被动,如果要把整的试验推翻从来,那要花很多的时间和精力,所以我还是希望能通过选择柱子解决我的问题。
    另外,我试过,升温至40度试,可还是不行,我选用的方法是美国药典的方法,也有很多文献用与我相同的方法,可我怎么就出现这样的情况呢。唯有一点不同的是美国药典使用了1.5ml的流速,我用1.0ml的流速,我想应该不为差异这么大的。

    北方海盗(herozxq) 发表:色谱峰前伸,原因很多:在不更换色谱柱的情况下,可能温度过低,或色谱柱本身损坏;在更换色谱柱的情况下,可能就是流动相选择不当,每种C18色谱柱,其C18填料有差异,例如碳载率,键合相官能团,颗粒粒度分布,孔体积大小等都不一样,例如ODS2和ODS就不完全一样,因此这时你需要适当调整流动相比例,色谱峰效果就会好。国产色谱柱质量不错,价格合理。欢迎致电大连依利特。

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  • 〓猪哥哥〓

    第11楼2010/12/08

    原色谱柱填料可能结合了强保留性成分,避免盐酸头孢替安的前沿。加入一些三乙胺试试吧

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  • chen168168

    第12楼2010/12/09

    ---------------------谢谢猪哥哥。

    〓猪哥哥〓(03yx2) 发表:原色谱柱填料可能结合了强保留性成分,避免盐酸头孢替安的前沿。加入一些三乙胺试试吧

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