一、荧光基础知识的学习 这里给初学者推荐一个学习荧光基础知识的好去处:Invitrogen荧光使用指南http://zh.invitrogen.com/site/cn/zh/home/support/Tutorials.html。网站分Introduction,Spectra和Light Filter and Sources三部分对荧光基础知识进行了详细介绍,教程采用的是Flash格式,图文音并茂,虽然讲解用的是英文,不过配上动画还是很好理解的,如果听不明白的话,可以点击右下角的“NOTES”查看字幕(图2)。相比于传统教材和文献中的文字图片介绍,MP做的Flash教程更适合初学者,直观,易懂。掌握好这三个教程,就算是入门了吧。
当使用多种荧光染料对各种细胞器和结构进行同时标记时,它们的选择搭配是有讲究的。这里给大家介绍一个很好玩的小工具:Cell Staining Simulation Tool(细胞染色仿真工具)。这是Invitrogen公司最近推出的一个实用小工具,链接http://zh.invitrogen.com/site/cn/zh/home/support/Research-Tools/Cell-Staining-Tool.html。从工具界面的左下角点击需要进行标记的细胞结构,然后选择想染的颜色,再从后面的产品栏中选择一个适合自己样品的染料(有些是染活细胞的,有些是染固定细胞的),选中的染料会出现在右上角,接着进行第二、三、四种细胞结构的标记,注意不同结构尽量选择不同颜色带中的染料进行标记,最后左上角会出现一个仿真的染色效果图。有了这个小工具,自己俨然成了个专画细胞肖像的大画家,赶紧先过把手瘾!我分两次用8种染料给这位细胞画了两幅肖像,第一幅是用DAPI,MitoTracker Red CMRos,Alexa 488 phalloidin与CellMask Deep Red plasma membranes stain分别标记了细胞核,线粒体,微丝和细胞膜(图4);第二幅是用LC3B antibody with Alexa Fluor 350,ER-Tracker Red,tubulin antibody with Alexa Fluor 647与NBD C6-ceramide分别标记了自噬小体,内质网,微管和高尔基体(图5)。这个小工具非常适合对荧光染料的激发光发射光参数不熟悉或不敏感的人,可以通过颜色带来直接挑选和搭配自己想要的染料,十分直观。