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【求助】求助！流动相改变对出峰的影响

yaoyao613

2010/12/12

液相色谱（LC）

大家好！我是菜鸟，现在在做毕业试验。我的是C18,250*46mm，流速1.3，柱温22。
原来条件是：
流动相A：0.175%磷酸溶液 B：乙腈
梯度洗脱：
0~20min 40-25%：60-75%
20~30min 25-0%：75-100%
30~40min 0-0%：100-100%

现在流动相加了个C：甲醇
A B C
0 40 60 0
20 25 75 0
28 0 100 0
30 0 100 0
33 0 0 100
34 0 0 100
38 40 60 0
40 40 60 0

请问一下这种实验条件改变对出峰时间峰型之类的有什么影响哈？

小女子感激不尽！

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神话

第1楼2010/12/12

原来的条件对于这个样品应该是可以的了，
加C应该是为了把后面没有走出来的杂质洗脱掉，以免在下一针影响主峰或者是缩短每一针的进样时间
这个梯度最后的平衡时间好像短了点，不知道你实际做的怎么样

0

神话

第2楼2010/12/12

觉得这个梯度设计得不是很合理那

0

阿三

第3楼2010/12/12

最后平衡两分钟太短啦跟不平衡有什么区别呵呵

0

有水有渝

第4楼2010/12/12

应助达人

我觉得对结果有影响是肯定的，分离度，峰形，保留时间，甚至出峰顺序等，但说再多的理论，还不如你用现在的设计条件预试验一次。

0

神鬼之约

第5楼2010/12/12

一般甲醇和乙腈不会同时用
有甲醇的话会让你的样品早出峰，对于你的最后2分钟一点用都没有

0

yaoyao613

第6楼2010/12/13

请问一般需要平衡多少分钟合适啊
神话(fcqxqyslzx) 发表:原来的条件对于这个样品应该是可以的了，
加C应该是为了把后面没有走出来的杂质洗脱掉，以免在下一针影响主峰或者是缩短每一针的进样时间
这个梯度最后的平衡时间好像短了点，不知道你实际做的怎么样

0

神话

第7楼2010/12/14

一般要10分钟
yaoyao613(yaoyao613) 发表:请问一般需要平衡多少分钟合适啊

0

poplar_yang

第8楼2010/12/15

有甲醇的话会让你的样品早出峰，应该是为了把后面没有走出来的杂质洗脱掉

0

阿三

第9楼2010/12/15

我们一般20-30分钟
yaoyao613(yaoyao613) 发表:请问一般需要平衡多少分钟合适啊

0

Vigorous

第10楼2010/12/15

一般乙腈100%洗后在加甲醇就没意义了。所以我觉得C完全可以不加。再是后来平衡太短！用这个梯度走下来基线肯定好看不到哪去！

0

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