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【分享】HPLC流动相的缓冲液

  • 省部重点实验室
    2011/02/22
  • 私聊

厂商论坛

  • 缓冲液流动相可以根据下面的操作步骤配制:



    1. 将缓冲液药品溶解在水中制成缓冲液(溶液A)。



    2. pH计确定或调节溶液ApH



    3. 将一定体积(如200ml)的有机溶剂B与由步骤2配制的溶液A(如800ml)混合,制成最终流动相(此处的有机相为20%)。



    4. 检查最终流动相的pH(此处为选项)。



    由于测定含有有机调节剂的流动相pH计发生漂移,使其测定pH不很可靠,所以上面的步骤4

    一般只有在考察误差的主要来源时采用,大多数实验室皆略去此步骤。



    步骤1一般是将配制缓冲液所用的两种试剂(A1A2)分别按计算量先溶解在水中制成水溶

    液,然后再将这两种溶液按一定的比例混合得到预期pH的溶液A。若在此步骤2中调节pH,则可以采用溶剂A滴定溶剂B,也可反过来滴定,并通过pH计测量得到所需pH的最终缓冲溶液。在大多数实验室中,pH的测量精度通常不会达到±0.050.1pH单位,这会显著影响一些样品的分离。当HPLC方法对pH非常敏感时,步骤2只能大致确定pH值。



    将准确称重的缓冲液配制试剂与精确体积的脱气蒸馏水混合,使其成为均一的溶液(不进一步调整pH),如此配得得缓冲溶液得pH可以控制在非常窄得范围内(±0.02单位),已知准确pH值得缓冲液浓溶液已有市售。
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  • 省部重点实验室

    第1楼2011/02/22

    为了改善峰形或塔板数,有时在流动相中加入酸或碱(如三乙胺、乙酸等),如果这些添加剂并非为配制缓冲溶液时所采用得试剂,那么将这些试剂加入到流动相中后,还需重新滴加酸或碱,使流动相达到所需的pH值。

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  • 省部重点实验室

    第2楼2011/02/22

    当缓冲液被稀释或浓缩时,pH也应不变。其pH值应近似恒定不变,或当其中的离解的阳离子(K+、Na+)或阴离子(Cl-、Br-)被其它种类的离子替换时,表1—4中给出了响应的配制方法,平衡阳离子为Na+,缓冲液的最终浓度为0.1mol/l,对于其它浓度的缓冲溶液或阳离子种类(通常K+)更好,表中的数据也可供参考。较稀的或较浓的缓冲溶液,及包含有不同阳离子的溶液,其pH值会与表中的数据稍有出入。在方法建立过程中,精确的流动相pH值往往并不重要,重要的是每次新配制的流动相的pH值与第一次基本相同(最好控制在±0.02范围内)。注意,只有当缓冲溶液的pH在缓冲试剂解离常数pKIa±1范围内时,缓冲溶液才具有有效的缓冲容量(如乙酸盐的pKa=4.6,其适宜的pH范围为3.6—5.6)。

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  • 山羊

    第3楼2011/02/23

    实践中体会到一次大型的实验所用流动相最好一次配够,在精确配置也有微小差异

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