【分享】6种常用抗菌中药对3株常见病原性细菌的抑菌作用检测

1材料与方法
1.1菌株的选择
选择三种不同病原性细菌的标准株：包括金黄色葡萄球菌ATCC29213，铜绿假单胞菌ATCC27853，大肠埃希菌ATCC29523作为受试菌株，以上菌株全部购自中国药品生物制品检定所。
1.2中药的选择
选择常用的清热解毒类中药（大黄、苦参、连翘、黄连、生地、知母)作为本次研究所用药物。全部药物购自河北北方学院中医门诊部。
1.3中药的提取
分别将上述中药置于37℃温箱烘干至易于研磨为止，准确称取50g中药于250mL蒸馏水中混匀，浸泡1h，用微火加热煮沸30min，收集煎液，用无菌滤纸过滤，继续加水250mL，同法煎制，30min后收集。将两次煎液收集合并，应用加热的方法将药液浓缩至最终质量浓度为1 g/mL。
1.4细菌的培养与稀释
将选定的实验菌株，接种普通琼脂培养基35℃孵育24h，进行菌落形态观察并进行生化反应再次鉴定后备用。菌液浓度的配制方法为，挑取菌落用2～3mL无菌生理盐水校正至0.5麦氏比浊单位，使其含菌量为1.5×108CFU/L。
1.5MIC的测定
按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的液体稀释法测定实验菌株的MIC值，通过琼脂平板抑菌法观察上述不同抗菌中药的MIC结果。具体应用2倍稀释法对药物进行稀释，稀释液为Mueller－Hinton液体培养基，每种中草药的剂量分别为0.100、0.050、0.025、0.0125、0.00625mg/L，在每个试管中加入1.5×108CFU/L的细菌10μL，35℃培养24h，分别转种普通平板培养基，24h后无细菌生长的试管则为MIC。所有试验均在不同日期重复3遍。
2结果
中药大黄、黄连和连翘对三种受试菌株都具有较强的体外抗菌活性，MIC值≤0.050mg/L，其中黄连对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强，MIC值为0.025mg/L。而知母、生地和苦参的抑菌作用相对较弱，MIC值＞0.100mg/L，不同中药对不同细菌表现出不同的抗菌特性。见表1。2008年6月薛建江等：6种常用抗菌中药对3株常见病原性细菌的抑菌作用检测第3期2008年6月河北北方学院学报（医学版）第3期表16种常用抗菌中药对3株受试菌的MIC结果
3讨论
抗生素的应用使人类许多严重的细菌感染性疾病得到有效控制。然而，由于抗生素的不合理使用导致了大量耐药性细菌的出现，降低了现有抗生素的应用效率，耐药性细菌感染严重地威胁着人类的健康。研究和开发抗菌中药对解决耐药菌株的产生和抗生素短缺问题具有重要意义，通过研究我们也看到，传统中药对常见病原细菌具有一定的抑制作用。
传统的中药抑菌实验方法存在着一些弊端，主要是培养基的使用不统一，菌液制备不标准，接种量也很难控制。因此，将抗生素敏感试验方法引入中药抑菌实验之中，改变了上述不足，可以将培养基、菌液浓度以及接种量进行标准化。从而有助于该方法的推广使用。
在实验中为了避免由于中药煎液的颜色影响对结果的观察，我们在不影响实验条件与结果的前提下对MIC检测方法进行了改进。采用琼脂平板方法来观察细菌在中药作用后是否生长。即将不同浓度中药与受试细菌作用后再分别转种普通平板培养基，通过在培养基上的生长情况来进行最小抑菌浓度的判定。实验结果表明我们的研究方法可行。
本研究结果显示，黄连、大黄与连翘抑菌作用较强。而另外三种药物的体外抑菌作用则较弱。不同中药对不同细菌表现不同的抑菌作用，我们的研究结果与有关报道一致［4］。
在所检测药物中黄连对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强，目前，金黄色葡萄球菌耐药性问题是临床治疗中面临的一大难题。大量研究报道也指出，黄连对耐甲氧西林的葡萄球菌具有一定的抑菌作用［5，6］，如果能够进一步对黄连的抑菌机理进行阐述，将有助于在金葡菌感染中尝试应用中药进行治疗。从而解决金黄色葡萄球菌的多重耐药问题。
在传统中药中进行抗菌药物的发掘，将有助于发挥传统中药在临床抗感染中的应用，本研究所建立的中药抗菌作用检测方法为中药抗菌作用的进一步研究奠定了基础。