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【求助】中药口服液质量标准制定的一些问题

  • bluewonjdeer
    2011/05/09
  • 私聊

化学药检测

  •  求助:中药口服LCMS.asp]液质[/url]量标准制定的一些问题

      第一次做新药,是一个中药复方口服液,主要成分中含有氢溴酸东蒗菪碱,质量标准制定如下:

      5.1.1色谱条件

      色谱柱:Promosil C18(250×4.6mm,5µm,);流动相:0.07mol/L磷酸钠溶液 (用磷酸调 pH值至6.0,含0.0175mol/L十二烷基硫酸钠)-乙腈 (2:1);流速:0.8ml/min;检测波长:216nm;柱温:25℃;进样量:10ul。理论塔板数按氢溴酸东莨菪碱峰计算应不低于10000。

      5.1.2 供试品和对照品溶液的制备

      5.1.2.1 对照品溶液 精密称取氢溴酸东莨菪碱10.18mg,置10ml容量瓶中,加0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)使溶解,并稀释至刻度,摇匀,制成每1ml含1.018mg的溶液(东莨菪碱重量=氢溴酸东莨菪碱/1.445)。

      5.1.2.2 供试品溶液 精密量取本品溶液5ml,置锥形瓶中,加入2mol/L盐酸溶液30ml,超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟,放冷,滤过,滤渣和滤器用 2mol/L盐酸溶液分数次洗涤,合并滤液和洗液,用浓氨试液调节pH值至9,用三氯甲烷振摇提取4次,每次30ml,合并三氯甲烷液,回收容剂至干,残渣用0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)溶解并移至5ml量瓶中,稀释至刻度,摇匀,即得。

      5.1.3 阴性对照品溶液的制备 按处方比例及工艺,制备缺洋金花的阴性样品,再按供试品溶液的制备方法制备不含洋金花的阴性样品溶液。

      5.1.4 测定方法

      精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10u1,分别注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱仪[/url](自动进样仪),测定峰面积,以外标法计算含量。

      5.1.5 系统适用性试验

      分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性品溶液10ul注入高效液相色谱仪,阴性对照品在氢溴酸东莨菪碱峰位置处无吸收峰,即其它成分对测定无干扰,氢溴酸东莨菪碱峰与其它组分峰基线分离良好。

      5.1.6 线性试验

      精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品10.16mg,置25ml量瓶中,加0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)溶解并稀释至刻度,摇匀。精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml,分别置10ml量瓶中,加0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)溶解并稀释至刻度,摇匀。按上述色谱条件测定,分别进样10ul,测得峰面积积分值。以对照品的浓度为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为:A=1.3×107C-9243.77,相关系数r:=0.9997。表明进样量在0.2032~1.2192ug范围内呈良好线性关系。

      5.1.7 稳定性试验

      精密量取供试品溶液5ml,按供试品(批号:2009010501)溶液制备方法制成供试品溶液,间隔一定时间(0,4,8,12,24,48h)重复进样,每次进样10ul,测得峰面积的RSD为1.78%,表明该溶液在48小时基本稳定。

      5.1.8 精密度试验

      精密吸取上述对照品溶液10ul,重复进样6次,测定东莨菪碱的峰面积,结果 RSD%为0.58%(n=6)。表明本方法精密度良好。

      5.1.9 重复性试验

      精密量取供试品溶液(批号:2009010501)5ml,按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液,分别测定东莨菪碱的含量,结果RSD为1.42%(n=6)。表明本方法有较好的重复性 。

      5.1.10 加样回收率试验

      5.1.10.1 对照品溶液的制备 精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品约7.8mg,置100ml的容量瓶内,加0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)使溶解,并稀释至刻度,即得。

      5.1.10.2 采用加样回收率测定方法,精密量取已知含量的样品2.5ml,精密加入上述对照品溶液2.5ml/2ml/3ml,按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液,依法测定,结果平均回收率为106.7%,RSD为1.42%。

      回收率=(测的东莨菪碱含量—样品中东莨菪碱含量)/加入东莨菪碱量

      因为是第一次作含量测定,有许多不明白之处,中药质量标制定准指导原则也说得不清不楚,许多都是按照自己理解摸索来的。

      通过测定样品的平均含量为0.077mg/ml。线性试验是根据样品的平均含量,以样品的平均含量为中间值,制定的线性取样范围。


      根据加样回收中对照品加入量与样品含量之和在线性范围的原则,按照80%,100%,120%的原则加入对照品,但是结果很不理想,加样回收率超过了200%,不知道是什么方面的原因,很着急,请大家帮忙分析一下,找出有错误的地方,我马上更改。
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  • 神话

    第1楼2011/05/09

    是不是计算的问题呢

    bluewonjdeer(bluewonjdeer) 发表:根据加样回收中对照品加入量与样品含量之和在线性范围的原则,按照80%,100%,120%的原则加入对照品,但是结果很不理想,加样回收率超过了200%,不知道是什么方面的原因,很着急,请大家帮忙分析一下,找出有错误的地方,我马上更改。

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  • bluewonjdeer

    第3楼2011/05/10

    不好意思 ,没有说明白 ,我用的是岛津的液相机子,用面积外标法计算,测定样品含量时的公式 为 : 样品峰面积*10.18mg*98%/对照品峰面积*5ml*10倍*1.445
    对照品峰面积为12404344.5,样品峰面积为6983970.5,6922532,6949904.5,6957659.5,
    6965083.5

    加样回收中对照品溶液2ml/2.5ml/3ml与80%,100%,120%表述的是一个意思,加样回收率计算公式为 :杨品峰面积*7.8mg*样品稀释倍数*98%/对照品峰面积*样品取样量*100倍 *1.445

    加样对照峰面积为1425672.938,对照品加入量为2.5ml时的峰面积为
    3433927.75
    3418554.25
    3503073.25
    3477568.5
    3489245.25
    3473198.5
    另外,我如何确定对照品取样量,才能保证样品含量测定的准确度。

    神话(fcqxqyslzx) 发表:是不是计算的问题呢

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  • 青林

    第4楼2011/05/10

    你的峰面积与对照的差异比较大,最好在90%--110%.


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  • bluewonjdeer

    第5楼2011/05/11

    供试品和对照品溶液的制备
    1. 对照品溶液 精密称取氢溴酸东莨菪碱10.18mg,置10ml容量瓶中,加0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)使溶解,并稀释至刻度,摇匀,制成每1ml含1.018mg的溶液(东莨菪碱重量=氢溴酸东莨菪碱/1.445)。
    2. 供试品溶液 精密量取本品溶液5ml,置锥形瓶中,加入2mol/L盐酸溶液30ml,超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟,放冷,滤过,滤渣和滤器用 2mol/L盐酸溶液分数次洗涤,合并滤液和洗液,用浓氨试液调节pH值至9,用三氯甲烷振摇提取4次,每次30ml,合并三氯甲烷液,回收容剂至干,残渣用0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)溶解并移至5ml量瓶中,稀释至刻度,摇匀,即得。
    我用的是面积外标法计算:
    我的计算公式为:样品峰面积×10.18mg×98%×1倍稀释÷对照品峰面积÷5ml÷10倍稀释÷1.445
    对照品峰面积分别为12405085,2403604
    样品峰面积分别为
    6983970.5
    6922532
    6949904.5
    6957659.5
    6965083.5
    我计算的含量分别为
    0.078mg/ml
    0.077 mg/ml
    0.077 mg/ml
    0.077 mg/ml
    0.077 mg/ml
    加样回收率试验
    1. 对照品溶液的制备 精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品约7.8mg,置100ml的容量瓶内,加0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)使溶解,并稀释至刻度,即得。
    2. 采用加样回收率测定方法,精密量取已知含量的样品2.5ml,精密加入上述对照品溶液2.5ml,按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液,依法测定。
    回收率=(测的东莨菪碱含量—样品中东莨菪碱含量)/加入东莨菪碱量
    我的计算公式为:样品峰面积×7.8mg×98%×2倍稀释÷对照品峰面积÷2.5ml÷100倍稀释÷1.445
    加样对照峰面积分别为
    1435563.25
    1415782.625
    加样回收样品峰面积分别为
    3433927.75
    3418554.25
    3503073.25
    3477568.5
    3489245.25
    3473198.5计算结果
    原有量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%)
    0.1925 0.195 0.51 163
    0.1925 0.195 0.505 160
    0.1925 0.195 0.52 168
    0.1925 0.195 0.515 165
    0.1925 0.195 0.52 168
    0.1925 0.195 0.515 165

    我的试验设置,及方法是否正确?

    青林(wyqql2060) 发表:你的峰面积与对照的差异比较大,最好在90%--110%.

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  • 雪妖

    第6楼2011/05/11

    我的计算公式为:样品峰面积×10.18mg×98%×1倍稀释÷对照品峰面积÷5ml÷10倍稀释÷1.445

    这里面的98%和1.445是什么

    你的回÷收率里面的计算公式,我认为有问题,你检测的是整个溶液当中的量,下面÷的2.5是什么呢,我也弄混了,不知道公式应该是什么样咯

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  • xiaowang268

    第7楼2011/10/31

    是不是计算错了

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  • zhaohua8011

    第8楼2011/10/31

    有可能计算错误,再则考虑你的对照品与样品测定是不是在工作曲线线性范围内!

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