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色谱峰达不到基线分离

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  • 我现在在做用RP-HPLC分离蛋白质,分离效果一直不理想(见谱图),谱图中的流动相比例是目前最好的,但是目标峰与前面的杂峰分离不开,达不到基线分离,希望各位高手可以指导一下,十分谢谢!色谱条件:ultimate XB-C18色谱柱(4.6×250mm,300A);流动相是0.1%三氟乙酸水和0.1%三氟乙酸乙腈;检测波长228nm,采用梯度洗脱。
  • 该帖子已被版主-月旭科技-雪妖加10积分,加2经验;加分理由:欢迎求助
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  • liuliuhui

    第1楼2011/08/20

    是不是柱子不是很合适呢?试用一下月旭其他的柱子呢?

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  • xue2009

    第2楼2011/08/20

    保留时间比较长了,导致峰展宽了,建议将保留时间缩短看看能不能分离的较好。

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  • lsx08

    第3楼2011/08/20

    嗯,正打算换一根柱子试试,不过就怕是样品本身的问题,分不开。

    liuliuhui(liuliuhui) 发表:是不是柱子不是很合适呢?试用一下月旭其他的柱子呢?

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  • lsx08

    第4楼2011/08/20

    这是我设置的梯度条件:

    梯度条件: 时间(min 流动相B

    05 10% 35.5%

    520 35.5%

    2021 35.5% 75%

    2125 75%

    2530 75% 100%

    3035 100% 10%

    3545 10%
    不知道这样跑梯度可不可以?5-20分钟的有机相再稍微调低的话前两个峰的分离会稍微好一点,但是主峰后面的杂峰的峰高会比主峰高很多,不知道是什么原因?

    xue2009(xue2009) 发表:保留时间比较长了,导致峰展宽了,建议将保留时间缩短看看能不能分离的较好。

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  • yuduoling

    第5楼2011/08/20

    可以试一下,然后看看图是什么样的

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  • huaibeijiayuan

    第6楼2011/08/28

    之前检测的谱图是怎样的呢,相差多少?

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  • liuliuhui

    第7楼2011/08/28

    看色谱峰的情况应该是可以分开的,就是没有达到基线分离,应该改下条件就会好的

    lsx08(lsx08) 发表:嗯,正打算换一根柱子试试,不过就怕是样品本身的问题,分不开。

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  • lsx08

    第8楼2011/08/30

    前面两峰分离好一点,但还是没有分开,后面的杂峰的峰高明显比主峰高很多,且峰形比主峰好。

    huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:之前检测的谱图是怎样的呢,相差多少?

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  • lsx08

    第9楼2011/08/30

    调了很多条件了,还是不行。

    liuliuhui(liuliuhui) 发表:看色谱峰的情况应该是可以分开的,就是没有达到基线分离,应该改下条件就会好的

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  • lsx08

    第10楼2011/08/30

    保留时间缩短的话要加大有机相比例,分离的更不好。

    xue2009(xue2009) 发表:保留时间比较长了,导致峰展宽了,建议将保留时间缩短看看能不能分离的较好。

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